华南师范大学试验报告.DOC

华 南 师 范 大 学 实 验 报 告 学生姓名 庄立栋 学 号 20072401052 专 业 理综2班 年级、班级 2007级 课程名称 生物化学实验 实验项目 维生素C的定量测定(2,6——二氯酚靛酚滴定法) 实验类型 □验证 □设计 □综合 实验时间 2008 年 11 月 3 日 实验指导老师 陈文利/徐杰 实验评分 一、实验目的： 　学习并掌握定量测定维生素C的原理和方法。 二、 实验原理： 维生素C具有很强的还原性。它可分为还原型和脱氢型。还原型抗坏血酸能还原染料2，6——二氯酚靛酚,本身则氧化为脱氢型。氧化性2，6——二氯酚靛酚在中性或碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色，还原后变为无色。因此，当用此染料滴定含有维生素C的酸性溶液时，维生素C尚未全部被氧化前，则滴下的染料立即被还原成无色。一旦溶液中的维生素C已全部被氧化时，测滴下的染料立即使溶液变成粉红色。所以，当溶液从无色转变成微红色时即表示溶液中的维生素C刚刚全部被氧化，此时即为滴定终点。如无其他杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含的还原型抗坏血酸成正比。从滴定时2，6——二氯酚靛酚标准液的消耗量，可以计算出被检物质中抗坏血酸的含量。 三、 材料试剂与器具： 1、 材料：椰菜花； 2、 试剂：标准抗坏血酸溶液、2%草酸溶液、1%草酸溶液、0.01%2，6——二氯酚靛酚溶液； 3、 仪器：锥形瓶（50ml）、移液管（1ml、10ml）、容量瓶（100ml）、微量滴定管； 四、 操作步骤： （一）、提取： 称取2.1g椰菜花，剪碎后放入研钵中，加入适量2%草酸，研磨成浆状，研磨后将浆状液转移到100ml容量瓶，再用适量的2%草酸洗涤研钵，再将洗液转入100ml容量瓶，重复此操作2——3次，然后用2%草酸定容至刻度，充分混匀后过滤，弃去最初几个ml滤液。 　 （二）、滴定： 1、标定2，6——二氯酚靛酚溶液： 　 取标准维生素C溶液1ml和9ml1%草酸一起加入50ml锥形瓶中，同时量取10ml草酸加入另一个50ml锥形瓶中做空白对照，用已标定的2，6——二氯酚靛酚溶液滴定至粉红色出现，15s不褪色。记录所用的ml数，计算每ml2，6——二氯酚靛酚溶液所用氧化维生素C的mg数（用K表示）。 2、样品的测定： 取50ml锥形瓶2个，分别加入滤液10ml，用已标定的2，6——二氯酚靛酚溶液滴定至终点，15s不褪色为止，整个滴定过程宜迅速，不宜超过2分钟，空白滴定方法同前， 记录两次所得的结果，求平均值V1，。 （三）、结果计算： 根据实验数据计算出每100ml样品的维生素C含量： 　　　　　　　　　　　　　　　　　 （V1-V2）×K×V×100 维生素C含量（mg/100g样品）= ─────────────── V3×W 式中：V1为滴定样品所耗用的染料的体积（ml）； 　 V2为滴定空白对照所耗用的染料的体积（ml）； 　 V为样品提取液的总体积（ml）； V3为样品测定时所用的滤液的体积（ml）； K为1mL染料氧化维生素C的量（mg）；。 W为称取样品的重量（g）。 五、结果与分析： （一）、数据与计算： 1、标定2，6——二氯酚靛酚溶液： 滴定准维生素C溶液所耗费的2，6——二氯酚靛酚溶液体积为： 滴定次数 第一次滴定 第二次滴定 平均值 标准液所耗用的染料的体积（ml） 2.92 3.00 2.96 空白对照所耗费的2，6——二氯酚靛酚溶液体积为：0.28ml 所以，每ml2，6——二氯酚靛酚溶液所用氧化维生素C的mg数K = 0.1 * 1 / (2.96 – 0.28) = 0.037mg 2、样品的测定： 滴定次数 第一次滴定 第二次滴定 平均值 滴定样品所耗用的染料的体积V1（ml） 1.00 0.96 0.98 空白对照所耗费的2，6——二氯酚靛酚溶液体积V2为：0.24ml 　3、每100ml样品的维