毛细管电泳溶解样品所用试剂选择.docVIP

毛细管电泳溶解样品所用试剂的选择 实验室用的毛细管电泳是安捷伦的电泳仪，刚接触的时候不太了解都有哪些因素对结果有影响，所以走了很多的弯路。毛细管电泳进样分为电动进样和压力进样，对于电动进样而言，并不稳定，有的时候不能保证将所有的样品分子类型全部进如果到毛细管内，所以我们在做电泳的时候最好都选择压力进样。 如图1所示，两个标有字母A的瓶子是盛有分离系统缓冲溶液的的瓶子，当到设定好的进样时间时，这是标有字母A的瓶子下来，标有字母B的瓶子上去，同时在B瓶上施加压力，这时在B瓶中的样品受压力的作用进入到毛细管柱内，这就是电泳的进样原理。 最初接触电泳的时候，对电泳的原理不是很了解，选用的是磷酸盐类的缓冲溶液，溶解样品直接用水溶解的。在进样的时候就出现了问题，每次进样后，仪器所显示的电流都是先减小，等到样品出峰后，电流又重新的回复到原来的状态，甚至有的时候没有电流，对试验结果影响很大。 目前所用的毛细管绝大多数是石英材料，当石英毛细管充入电解质时，管壁材料会部分解离成负离子，使管壁带负电荷，由于静电吸引，负离子吧溶液中的阳离子吸引到管壁附近，形成一层阳离子相对过剩的电层，这样就如同在带负电荷的毛细管内壁次形成一个圆筒型的阳离子鞘，如图二所示。此主题相关图片如下样品溶液选择2.jpg： 从图2中看以看出，在缓冲溶液冲洗柱子的过程中，毛细管柱内离子已经达到了一个相对平衡的状态，而当把用水溶解的样品以压力进样的方式压进毛细管柱内后，这段样品所在的溶液相对缓冲溶液而言，离子强度非常的小，甚至会出现电泳零的状态，这个时候也就相当于断流，如图3所示，仪器不再工作，因为电泳现象发生的首要条件就是能够成一个回路。同样的道理，只用有机试剂溶解样品也存在这类似的问题，不过选择有机试剂溶解样品，有些试剂在电泳中也能解离，但效果仍然不如用缓冲溶液溶解样品。