StarPure 无内毒素超纯质粒小提试剂盒.PDFVIP

StarPure Endo-free Plasmid Miniprep Kit StarPure 无内毒素超纯质粒小提试剂盒 【货号及规格】D207-01，50 rxn 【产品概述】 本产品采用改良的碱裂解－中和法，结合硅胶膜吸附技术和内毒素清除剂，使质粒DNA获得高效、专一的吸附,经过两步洗涤， 清除基因组DNA、RNA、包括内切酶在内的蛋白质和内毒素等杂质，内毒素清除率在90%以上，提取的质粒可直接用于转染 真核细胞、荧光测序、酶切、PCR、转化、体外转录等各种常规分子生物学实验。 本试剂盒适宜从大多数革兰氏阴性细菌中提取质粒。通常4 ml过夜培养的菌液中可以获取10 µg左右纯净的高拷贝质粒DNA， 提取效率达到50%以上。对20 kb以下的质粒效果更佳。提取的质粒稳定性好、纯度高，操作简便快捷，无需苯酚/氯仿抽提或 乙醇沉淀，安全健康。 【产品组分】 满足50 次质粒小提实验 【保存条件】 成分 总量 注意事项 细胞悬浮液（S1） 10 ml 加入RNase A 后，请于4℃保存，有效期半年 细胞裂解液（S2） 20 ml 用毕立即盖紧瓶盖；如有结晶析出，可于55℃水浴加热助溶 中和缓冲液（N3） 15 ml 膜结合液（MB） 35 ml 去蛋白液（PR） 30 ml 如有结晶析出，可于55℃水浴加热助溶；请勿直接接触皮肤 浓缩漂洗液（WB） 20 ml 初次使用前加入35 ml 的无水乙醇混匀 洗脱缓冲液（EB） 10 ml RNase A 溶液 100 μl 室温保存六个月，-20℃保存一年 内毒素清除剂 5 ml 常温运输，4 保存，使用前充分混匀；如果出现分层，可冰浴后混匀使用℃ 离心吸附柱及收集管 50 套 密闭干燥 产品说明书 一份 内毒素清除剂4 保存℃ ,其余产品组份室温（15~30℃）保存，有效期一年 【实验准备】 • 用户需自行准备的材料：含适当抗生素的LB 培养基，无水乙醇，1.5 ml 灭菌离心管，台式离心机。 • 初次使用本试剂盒，请向细胞悬浮液（S1）中加入100 μl 的RNase A 溶液，向浓缩漂洗液 （WB ）中加入35 ml 的无水 乙醇 （用户自备）至终体积55 ml，并在试剂瓶上做标记。 【操作步骤】 本实验方法适用于从 1~10 ml 过夜培养的大肠杆菌菌液中提取质粒。提取量受菌株、质粒拷贝数、菌液体积和培养时间、培 养基类型等因素的综合影响。 1. 收菌：将过夜培养（12~16 小时）的菌液于室温≥10,000 x g 离心1~2 分钟，彻底弃除上清。 高拷贝质粒建议使用≤5 ml 菌液，低拷贝质粒建议使用≤10 ml 菌液；菌液用量过大不仅不能增加质粒产量，反而会因裂解不全或杂 质封闭硅胶膜而降低产量。 2. 重悬：加入150 μl 细胞悬浮液（S1），充分混悬振荡或用枪头反复抽打使细菌彻底分散悬浮。 3. 裂解：加入300 μl 细胞裂解液（S2），轻轻上下颠倒混合5 次，室温静置1~5 分钟，待细菌充分裂解，溶液变半透明。 避免剧烈振荡导致基因组DNA 裂解；裂解时间不能超过5 分钟。 4. 中和：加入250 μl 中和缓冲液 （N3），轻轻上下颠倒混合5 次，充分混匀，避免剧烈振荡。室温下≥12,000 x g 离心 北京康润诚业生物科技有限公司 GeneStar Biosolutions Co., Ltd. 北京市昌平区生命园路 29 号创新大厦 B 座 208 室 102206 Tel: 400-666-3332 Email: tech.service@ Web: 10 分钟。 5. 去除内毒素： (1) 小心吸取上清 （约650 μl），转移到干净的1.5 ml 离心管中，加入1/10 体积 （约65 μl）预冷的内毒素清除剂，