高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术在比格犬中的建立-董立厚.docVIP

高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术在比格犬中的建立及应用 董立厚，宋海峰( （军事医学科学院放射与辐射医学研究所，北京 100851） 摘要目的：高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术方法：高胰岛素-正葡萄糖钳夹结果：± 3.8 mIU·L-1，显著高于基础胰岛素水平；血清C肽浓度显示内源性胰岛素受到了明显的抑制。结论建立高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术。 关键词：高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术；；比格犬 euglycemic clamp technique was established in beagle dogs [Abstract] Objective: To establish euglycemic clamp technique in beagle dogs. METHODS: The euglycemic clamp technique was applied in healthy beagle dogs and the blood glucose, insulin, C-peptide, insulin and glucagon were monitored during the clamp period. RESULTS: The blood glucose level was controlled within the basal level, coefficient of variation being less than 5% during the clamp period. The serum insulin concentration finally reached to the level of 40.0 ± 3.8 mIU·L-1 stably and a significant inhibition was showed in endogenous insulin by the determination of C-peptide. But there was not significant increase of serum glucagon compared with basal values. CONCLUSIONS: Methodology confirmed that the euglycemic clamp technique is successful in beagle dogs and can be applied in study of pharmacodynamics of insulin preparations. KEY WORDS: euglycemic clamp technique; pharmacodynamics; beagle dogs 高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术1材料与方法 1.1动物 ，体重 ± 2 kg，军事医学科学院动物中心产。动物生产许可证号：京动字号分笼用标准饲料养巴甫洛夫吊带在RD SYSTEMS公司产Quarantine? IVD? human Erythropoietin ELISA试剂盒测定；C肽放免试剂盒及胰高血糖素放免试剂盒（由解放军总医院免疫实验室提供并检测）。 1.3仪器μVP5005输液泵（瑞士艾美达μSP5005注射泵（瑞士艾美达1.4方法1.4.1高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术的建立 比格犬禁食1h后，用巴甫洛夫吊带固定实验上。在一侧前肢建立静脉通道，该通道连接三通管一端连接胰岛素注射泵，一端连接葡萄糖输注泵前肢℃左右以使静脉血动脉化[7]。待比格犬安静30分钟后，连续测定3次基础血糖，每次间隔10分钟，待血糖稳定后，将目标血糖设为基础血糖水平。首先快速输注胰岛素（·kg-1·min-1）迅速将胰岛素提高到较高的浓度水平，以抑制内源性胰岛素的分泌，然后逐渐降低速度，大约10min后血糖下降，将胰岛素输注速度设定为0.8 mU·kg-1·min-1[8,9]。间隔5min测血糖，根据血糖调节葡萄糖输注速度，调节血糖在目标范围内，避免低血糖引起神经内分泌反应。并分别于0、10、30min，1、1.5、1.75、2 h取血并检测胰岛素及C肽的血清浓度。钳夹结束时，停止泵入胰岛素预防低血糖发生。然后逐渐减少葡萄糖输入速度。℃保存待测。 1.4.2血清应用放射免疫分析（RIA）方法次血糖值的均数和标准差,再按/X计算变异系数。基础状态与钳夹稳态期比较采用配对t检验。 .1血糖水平 5只比格犬的基础为.0 ± 0.1 mM·L-1。钳夹建立后只比格犬由于个体差异导致葡萄糖输注率（GIR）较大，但血糖达到目标水平.9 ± 0.1 mM·L-1，与基础状态无）血糖变异5%。 图1 比格犬在钳夹建立过程中血糖及GIR-时间曲线 2.2葡萄糖输注率 外源性胰岛素在钳夹实验开