鲫外周血淋巴细胞的分离及观察.pdfVIP

2008年第6期 鲫外周血淋巴细胞的分离及观察 秦玉丽，汪成竹 (信阳农业高等专科学校，河南 信阳464000) 摘要：采用密度为1．085 g／mL的聚蔗糖一泛影葡胺(Ficoll—hypaque)分离液在 20℃，800 g，离心 20 min的情况下，可将鲫外周血中的淋巴细胞有效地分离出来，每毫升外周血可分离到的淋巴细胞 数量平均为4．88×10 个，淋巴细胞回收率为76．21 9／5～93．79 ，细胞存活率≥96 。 关键词：鲫；淋巴细胞；分离；观察 中图分类号：$965．111 文献标识码：A 文章编号：1004—3268(2008)06一O118—03 Separation and Observation of Lymphocyte r ／弋 · Ot arassz s a ratuS QIN Yu—li，WANG Cheng—zhu (Xinyang Agricultural College，Xinyang 464000，China) Abstract：The lymphocyte of carp peripheral blood could be separated by the density 1．085 g／mL Ficoll—hypaque at 20。C and 800 g centrifugation for 2O min．The average number of lymphocyte cells was 4．88× 10 in one milliliter of blood，and the rate of lymphocyte recovery was 76．21 一 93．79 ．The cell survival rate was greater than or equal to 96 ． Key words：Carassius auratus；Lymphocyte；Separation；Observation 随着水产动物疾病免疫防治技术的发展，鱼类 水产站，体重 300～350g，体长21～26 cm，无病无 免疫机制的研究越来越受到人们的关注。鱼类的免 伤，活泼健康。于2m×2m×1m水泥池中饲养一 疫系统虽不及哺乳动物发达，但其外周血淋巴细胞 周，每天早晚各投喂一次颗粒饲料(武汉高龙饲料有 也是分成T细胞和B细胞两大类，淋巴细胞经诱导 限公司产品)，视水质情况换水。确认鱼体健康正常 后转化为淋巴母细胞，随着形态的变化，合成并释放 后用于试验。 出多种细胞因子和抗体等效应分子以调控免疫应答 1．2 淋巴细胞分层液的制备 的产生。要研究鱼类的免疫机制，首先必须从血液 首先通过体积称量法算出76％泛影葡胺的密 或者其他淋巴组织或器官中分离提取足够数量、高 度，然后将淋巴细胞分离液和泛影葡胺按照不同体 纯度的有活性的淋巴细胞。分离鱼类淋巴细胞的方 积比混合在一起，配制成密度分别为1．077，1．080， 法很多，目前比较常见的是聚蔗糖一泛影葡胺(Fi— 1．083，1．085，1．087，1．090 g／mL的淋巴细胞分 coil—hypaque)分层液密度梯度离心法，该法简单易 层液。 行，所分离的淋巴细胞的纯度、得率和活力都比较 1．3 鲫外周血淋巴细胞的分离 高。本试验即采用此法分离鲫淋巴细胞。 鲫外周血淋巴细胞的分离参照 Verburg—van