细胞β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒产品说明书（中文版）主.PDFVIP

细胞 β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒产品说明书（中文版） 主要用途 细胞β-半乳糖苷酶原位染色试剂是一种旨在以X-Gal 为底物，通过细胞内表达的外源性细菌β- 半乳糖苷酶的催化所生成的深蓝色的沉积产物，从而在光学显微镜下观察到蓝色表达的细胞，藉此建立一 种简单的目测颜色来识别报告基因阳性细胞的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、 成功实验证明的。广泛应用于基因组学、蛋白质组学和其它分子生物学研究。其适用于转基因后的人体和 动物细胞。产品即到即用，性能稳定，参数优化，着色敏感，堪称国际上同类产品最佳。 技术背景 大肠杆菌的标志基因 Lac Z 编码 β-半乳糖苷酶（ß-galactosidase ；ß-gal ），在其催化作用下，半乳糖可从乳 糖的水解作用中得到。β-半乳糖苷酶非常稳定，对蛋白水解降解作用抗性强，且容易测试。因此 β-半乳糖 苷酶成为目前最常用的报告基因，以评价载体转染的效果。X-Gal （5-bromo-4-chloro-3-indoyl- ß-D-Galacto pyranoside ）是生物化学中常用的一种有机物，β-半乳糖苷酶可以将 X-Gal 转化为蓝色的产物，由此用它作 为生色底物，来建立一种简单的目测颜色来确定细胞 β-半乳糖苷酶的活性，从而通过光学显微镜鉴别转染 细胞报告基因的存在与否和强弱表现。 产品内容 清理液（Reagent A ） 毫升 固定液（Reagent B ） 毫升 稀释液（Reagent C ） 毫升 染色液（Reagent D ） 毫升 产品说明书 份 保存方式 保存染色液（Reagent D ）在－20 ℃冰箱里；其余的保存在 4 ℃冰箱里；稀释液（Reagent C ）和染色液（Reagent D ），用铝箔封裹，避免光照；有效保证6 月 用户自备 2 毫升离心管：用于配制染色工作液 15 毫升锥形离心管：用于配制染色工作液 恒温培养箱：用于染色孵育 光学显微镜：观察染色后的组织细胞 1 实验步骤 操作一、25cm2细胞培养瓶染色 实验开始前，将试剂盒里的染色液（Reagent D ）从－20 ℃的冰箱里取出，置入冰槽里等待溶化。 然后移取 xx 毫升稀释液（Reagent C ）到 2 毫升离心管，加入 xx 微升染色液（Reagent D ），混匀后，置入暗室里，室温下，标记为染色工作液。然后进行下列操作： 1． 小心抽去 25cm2细胞培养瓶里的培养液 2 ． 小心加入 xx 毫升 清理液（Reagent A ），清洗生长中的细胞表面 3 ． 小心抽去清理液 4 ． 小心加入 xx 毫升 固定液（Reagent B ），覆盖整个生长表面 5 ． 在室温下孵育 5 分钟 6 ． 小心抽去固定液 7 ． 小心加入 xx 毫升清理液（Reagent A ），清洗细胞表面 8． 小心抽去清理液 9 ． 重复实验步骤 7 和 8 一次 10．小心加入xx 毫升染色工作液，覆盖整个细胞表面 11．放进37℃培养箱，孵育 3 小时至 24 小时，或直至细胞呈现蓝色（注意：避免液体蒸发） 12．在光学显微镜下观察和计数：表达 β- 半乳糖苷酶活性的细胞为阳性细胞，呈现蓝色 13．（选择步骤）核固红复染：细胞核呈现粉红色（建议使用 核固红复染试剂盒――HL40011） 操作二、24 孔细胞培养板染色 实验开始前，将试剂盒里的染色液（Reagent D ）从－20 ℃的冰箱里取出，置入冰槽里等待溶化。 然后移取 xx 毫升稀释液（Reagent C ）到 15 毫升锥形离心管，加入 xx 微升 染色液 （Reagent D ），混匀后，置入暗室里，室温下，标记为染色工作液。然后进行下列操作： 1．小心抽去24 孔细胞培养板里的培养液 2 ．每孔加入xx 微升清理液（Reagent A ），清洗生长中的细胞表面 3 ．小心