一种可绝对定量核酸的数字PCR微流控芯片朱强远.pdfVIP

Vol． 34 高 等 学 校 化 学 学 报 No． 3 20 13 3 CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES 545 ～ 550 年 月 doi :10 ． 7503 / cjc 一种可绝对定量核酸的数字PCR 微流控芯片 ， ， ， ， ， ， ， ， 朱强远 杨文秀 高一博 于丙文 邱 琳 周 超 金 伟 金钦汉 牟 颖 ( ， ， 浙江大学工业控制技术国家重点实验室 智能系统与控制研究所 ， 310058) 分析仪器研究中心 杭州 ( PCR) 摘要 构建了一种新型的可进行核酸单分子扩增和核酸绝对定量的数字聚合酶链式反应 数字 微流控 ． ， (PDMS) ， 3 芯片 应用多层软光刻技术 以聚二甲基硅氧烷 作为芯片材料 盖玻片作为基底制作了具有 层结 ． ， 4 ， 构以及微阀控制功能的微流控芯片 芯片的大小与载玻片相当 可同时检测 个样品 每个样品通入芯片后 640 ， 6 nL． A549 18sRNA 平均分配到 个反应小室 每个小室的体积为 以从肺癌细胞 中提取的 为样品检测了 ． ， 640 ． 该芯片的可行性 将样品稀释数倍后通入芯片 核酸分子随机分布在 个小室中并扩增 核酸分子在芯片 ， 0. 5 / ， 中的分布符合泊松分布原理 当样品中待测核酸分子平均拷贝数低于 个 小室时 则每个反应小室包含 0 1 ． PCR ， ， 个或 个分子 经过 扩增后 有模板分子的小室检测结果为阳性反应 而无模板分子的小室为阴性反 ， ， DNA ． ， 应 最后通过计数阳性反应室的个数 可绝对定量原始待测样品中的目标 分子拷贝数 实验结果表明 PCR DNA ， 、 、 该数字 芯片可实现 单分子反应和核酸绝对定量 具有成本低 灵敏度高 节省时间和试剂以及操 ， PCR ， 作简单等优点 为数字 方法在普通实验室的应用提供了一种新途径 可用于癌症及感染性疾病的早期 、 、 ． 诊断 单细胞分析 产前诊断以及各种细菌病毒的核酸