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现代分子生物

分子生物学:广义:从分子的形式来研究生物现象的学科 狭义:从分子水平理解生命活动,主要指遗传信息的传递(复制)、保持(损伤和修复)、基因的表达(转录和翻译)与调控。 双螺旋结构的特点:A与T,C与G配对,以氢键结合;双链反向平行(以5’~3’为正方向),从两端看结构相同;两条主链由脱氧核糖和3’-5’磷酸二酯键交互连接而成;碱基位于内侧。通常DNA在细胞中以B-DNA形式存在,但可能发生改变;DNA-RNA杂交分子呈A型。 B-dna基本参数:直径:2.0 nm;螺距:3.4 nm;每匝 10 bp/10.5bp;每一碱基对比另一对沿轴旋转36°。 A-DNA:*B-DNA(含水量92%)脱水后变形为A-DNA(含水75%),相邻磷酸间距缩小,每匝增为11 bp。*总体变得宽而短;大沟变细、加深;小沟变得宽而浅。 Z-DNA与B-DNA的比较:最大区别:Z-DNA为左旋!由部分碱基反转平面所致。螺距4.5 nm,每对碱基上升0.37 nm,每匝12bp。主链变的不平滑,从之字形,以Zig-Zag得名为Z-DNA。可能与基因的调控有关 DNA的高级结构: DNA的高级结构指DNA分子(双螺旋)通过扭曲和折叠所形成的特定构象。包括不同二级结构单元间、单链与二级结构单元间的相互作用以及DNA的拓扑特征。超螺旋是DNA高级结构的主要形式。可分为正超螺旋和负超螺旋。 DNA的几种超螺旋的状态:正超螺旋(positive supercoil):DNA扭曲方向与双螺旋方向相同,形成正超螺旋(双链紧缠);负超螺旋(negaive supercoil) DNA扭曲方向与双螺旋方向相反,形成正超螺旋(双链松缠) 天然原核生物呈现负超螺旋:DNA负超螺旋易于解链,在DNA复制、重组和转录等过程中都需要两条链解开,所以负超螺旋利于这些功能的实施。 溴化乙锭:在体外可形成正超螺旋,如加入溴化乙锭(EtBr,EB),可引入正超螺旋。 核酸的稳定性:*氢键:在蛋白质和核酸中,氢键并不能使之稳定。其对大分子的特殊结构有作用:比如,α-螺旋,β折叠,DNA双螺旋等。*碱基堆积力(stacking interaction):核酸分子稳定性的根源。疏水的碱基堆积起来,使水分子排除在外,从能量的角度来讲最为稳定。 减色效应(Hypochromicity):单一的核苷酸在260nm(A260)的光吸收值最大,其次是单链DNA(ssDNA)或RNA,而双链DNA(dsDNA)最小 。即dsDNA相对于ssDNA是减色的(hypochromic)。由于碱基在疏水环境中的堆积所造成 。 增色效应(hyperchromatic effect): DNA双链分离时,伴随着在260nm处的吸光值的增加。增加的过程为慢-快-慢的S形曲线。增加到中点时的温度叫作熔(融)解温度(melting temperature)。 DNA的纯度:A260/A280:dsDNA—1.8;Pure RNA—2.0;Protein—0.5; 染色体的组成?㈠DNA:染色体的主要化学成分,也是遗传信息的载体 ㈡蛋白质:①组蛋白:染色体中的碱性蛋白质,其特点是富含二种碱性氨基酸(赖氨酸和精氨酸) ②非组蛋白:染色体中组蛋白以外的蛋白质,是一大类种类繁多的各种蛋白质的总称。㈢RNA:含量很少,还不到DNA量的10%。 染色体的包装过程?㈠DNA经过1/7的压缩(DNA绕组蛋白)形成核小体㈡核小体再经过1/6的压缩(6个核小体围成一圈螺旋)形成螺线管结构㈢螺线管结构经过1/40的压缩(螺线管进一步螺旋化)形成30nm超螺旋管纤维㈣30nm超螺旋管纤维经过1/5的压缩(超螺旋管进一步盘绕和压缩)形成染色单体。(算一算经过这几级包装之后,DNA被压缩了多少倍?7×6×40×5=8400) C-值:一个单倍体基因组的DNA含量是恒定的,称为C-值。  C值矛盾:是指真核生物中DNA含量的反常现象.主要表现为: ㈠ C值不随生物的进化程度和复杂性而增加,如肺鱼的C值为112.2,而人的是3.2,与牛相近.㈡ 亲缘关系密切的生物C值相差甚大,如豌豆为14,而蚕豆为2. ㈢ 高等真核生物具有比用于遗传高得多的C值,如人的染色体组DNA含量在理论上包含300万个基因,但实际有用途的基因只有4万左右. 原核生物基因组的主要特点有哪些?1、结构简练。其DNA分子绝大多数用于编码蛋白质,不翻译的序列只占4%;2、存在转录单元(为多顺反子mRNA).3、基因重叠即同一段DNA片段能够编码两种甚至三种蛋白质分子。 病毒基因组最主要的特点是什么?一个是病毒基因组非常“经济”,一个是为多顺反子mRNA。我们如何知道真核生物具有重复序列?这些重复序列有哪些类型?㈠根据复性动力学特征,,重复频率(即每一组分的拷贝数)f=化学(复杂

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