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乳腺癌原代细胞培养方法的研究进展 [摘要] 原代细胞培养就是将取得的肿瘤组织或细胞在体外进行的首次培养，通过原代培养获得的肿瘤细胞可为日益深入的肿瘤研究及治疗提供充足有效的细胞来源。乳腺癌的原代培养成功率低，使其广泛应用受到限制，但我们相信随着科研技术的进步，其仍然可能成为乳腺癌肿瘤在体外研究的重要技术手段，为乳腺癌患者带来福音。 [关键词] 乳腺癌；细胞培养 [中图分类号] R734.4 [文献标识码]A [论文编号]00000 乳腺癌是女性严重威胁生命健康的常见恶性肿瘤之一，约占全身恶性肿瘤的7%～10%，在我国乳腺癌的发病率正逐年增加，仅次于子宫颈癌。目前，乳腺癌治疗仍是以手术切除为主，视具体情况辅以化疗、放疗、内分泌及生物治疗等综合治疗模式。作为实体瘤中应用化疗最有效的肿瘤之一，乳腺癌的辅助化疗在多学科综合治疗中扮演者一个相当重要的角色，可以消灭患者手术后体内残留的癌细胞及微小转移灶，在提高肿瘤的治疗疗效、改善患者的生活质量及延长生存期等方面起到了肯定的作用。特别是浸润性乳腺癌，术后应用化学药物辅助治疗，可以改善其生存率[1]。但目前临床化疗还存在着许多的不足，其中一个重要原因是不同个体及不同肿瘤类型对各种化疗药物的敏感性存在较大差异。化疗前进行的乳腺癌细胞药物敏感性试验，可推测肿瘤细胞对不同药物的敏感性，实行有的放矢的个体化疗，提高化疗的有效率。乳腺癌细胞药敏试验的前提是将瘤细胞培养成活即乳腺癌的原代培养。通过原代培养建立的细胞系或株还可为进一步研究相应肿瘤癌变、浸润转移机制提供了极为方便的细胞模型。所以本文就乳腺癌的原代培养及其意义作如下综述。 1 乳腺癌的原代培养 1.1 乳腺癌原代培养的方法 原代培养也叫初代培养，是从供体取得组织或细胞后在体外进行的首次培养。乳腺癌的原代细胞培养既是将乳腺癌癌组织从患者体内分离出来，然后在体外模拟体内肿瘤细胞存活的微环境，对其提供最佳的营养、PH值、温度及二氧化碳浓度等，使其在体外存活。体外原代培养常用的方法有3种:组织块培养法、消化培养法和细胞培养法[2]。 组织块培养法。组织块培养法是常用的、简便易行和成功率较高的原代培养方法。即将从肿瘤患者取得的肿瘤组织剪成小块后，根据不同细胞需要接种于经适当处理的培养皿或培养瓶。组织块法操作简便，部分种类的组织细胞在小块贴壁培养24h后，细胞就从组织块四周爬出。 消化培养法。将得到的肿瘤组织，通过切割或者反复剪切制成较小的组织块，然后使用酶消化液把组织块进一步松散，将妨碍细胞生长的细胞间质包括基质、纤维等去除，使细胞分散形成悬液，易于从外界吸收养分和排出代谢产物，实现肿瘤细胞的体外培养。目前主要应用的消化酶以胶原酶和胰蛋白酶为主。 (1)胶原酶消化培养。胶原酶的化学名为胶原蛋白水解酶，它对胶原的化学作用很强，能特异性地水解天然胶原蛋白的三维螺旋结构，从而分解细胞间质，但对上皮细胞的影响不大。因此，适于消化分离纤维性组织、上皮及癌组织。胶原酶消化培养则是指利用胶原酶的特性，对组织块进行消化松散，实现肿瘤细胞的原代培养。但不同组织细胞分离的纯度，细胞活性强度与酶消化的浓度、时间及温度等因素有着密切的关系[3，4]。(2)胰蛋白酶消化培养。胰蛋白酶是目前应用最为广泛的消化试剂。适用于消化细胞间质较少的软组织，如胚胎、上皮、肝、肾等组织。对传代培养细胞的效果也很好。但对于纤维组织及较硬的癌组织作用差，胰蛋白酶的消化效果主要与PH值、温度、胰蛋白酶的浓度、组织块的大小和硬度有关。其能使脓、痰液、血凝块等分解、变稀，易于引流排除，加速创面净化，促进肉芽组织新生[5，6]。利用其蛋白质水解酶的本质特性，消化松散肿瘤组织块，消除细胞连接，从而释放肿瘤细胞，制成细胞悬液进行原代细胞培养。 细胞培养法。细胞培养法是用机械或化学方法将乳腺癌组织分散或从癌组织中分离出活的癌细胞，在体外进行培养和传代。与组织块培养法相反，该法常容易使肿瘤组织失散，是一种细胞和派生细胞的关系。 1.2 乳腺癌各种培养方法的优缺点 组织块培养法的优缺点。组织块培养法是目前最常用的培养方法，有着众多优势，有学者研究对乳腺癌细胞株两种原代培养的方法进行比较，结果组织块培养法的成功率为90.0%，细胞培养法的成功率为20.0%。从而得出结论，组织块培养法是较好的原代培养方法[7]。但其在实际应用中也存在着本身的缺点，由于在组织取材时不能保证每一步的无菌操作都准确无误，所有的组织块均彻底消毒无菌，所以很难避免细菌污染的问题。另外在反复剪切和接种过程中对组织块的损伤，所以在培养的过程中，并不是所有的组织块都能游出肿瘤细胞，又由于成纤维细胞的生存和适应能力强，较早于肿瘤细胞从组织块中爬出，还可包绕组织块后导致肿瘤细胞难以爬出而培养失败。此外组织块培养法耗时较长的缺点[8]。 消化培养法的