应用X-Y同源基因对性连锁遗传病进行产前性别诊断.pdfVIP

中国优生与遗传杂志2001年第9卷第6期 应用x—Y同源基因对性连锁遗传病进行产前性别诊断 t其玮．张红岩。马守中．刘肖量 (青岛计划生育科研所，266071) 摘要； 目的：建立一种对性连锁遗传捣胎儿进行产前诊断的方法。方法：采用x—Y同源序列和SPY基因的两对引 病的产前性别谤断，方法可靠准确。 关键调：性别鉴定；性连情遗传病；产前谤断；聚合酶链反应；x—Y同源引特 性别鉴定在性连填遗传病的产前诊断中起重要作用。 至500mi)。显色至条带清晰可见。 多种性连饿遗传病的产前诊断都必须在性别鉴定的基础上 6．结果判断：出现106bp，112bp和IS0bp3条带可判断为 进行。因此应用一种快速、简便、可靠的方法至关重要。本 男性，仅出现l条106t，p带时。则判断为女性，(见图) 研究采用了x—Y同源引物。同时选用性别决定基因(sliY， 啦detemfiningr皤田d吐leY)中一对特定引物。进行聚合酶 链反应复合扩增．得到丁可靠结果，提高了产前性别鉴定的 准确性。 资科与方法 1．研究对象：为本所门诊中与性连锁遗传病有关的咨询 妇女．现再次妊娠的孕妇共22倒．在孕16周左右按常规经 5nbp 腹抽取羊水5ml。 揪} 2．羊水DNA提取：取500ld羊水离心去上清渡加iml生 理盐水洗涤，离心弃上清，加50m无菌双蒸水悬浮细胞．再 墨二二0巳。。：．。． 加100tdl0％Chelex一100，56℃水浴30分钟，剧烈震荡10秒。 一 煮沸10分钟．再剧烈震荡10秒．100(}0转／分离心2分钟。取 1 2 3 4 5 上清藏20正准备做PCR扩增。 国l性别鉴定蛄秉 3．pCR引物：引物对A按文献…设计合成X—Y问源引 泳道i．★性对煎2．3．羊水肇剥的齐性坫果 铀 4．男性|照5．+Ⅺ74／陆Ⅲ珊Ⅱkr At：5’一0C[翔。(；GCI(：II卫’A～!IGG胡ACiIG一3’． A2：5’一闻旧^G^(；c兀AMcIo。C拽^(；GIG一3’。扩增产 结 果 物女性仅见106bpI条带，男性为106bp和112bp2条带。引 f 1．22倒孕妇的情况见表1．孕妇的平均年龄为32．65 物对B选用SRY基因片臣(DYS388)[zl，扩增产物为150bp． 4．5岁。平均孕周为18．4±3．5周。 男性有1条带．女性则没有带。B1：5’一0cnc[B^0G^D 衰1 产前诗—i孕妇的疾囊分布情况 GfOC超TAE：一3’。B2：5’一Cr^^GI【：Il》GI(卸鬣蚺A0。GG一3’。 疾{^羹型 州奠 4．PcR复合扩增：在0．5ml的邱印d耐管中，依次加入下 列试剂：引物对A 摹一齄为进行性肌营鼻不t(nVD或琢压” 王6 0．I胂N,／L．引物对B0．1／nax-I／L心qTPs 200F。ld／L_10XIzzffer2．5“羊水12qA5皿，加水至总体积 丈夫为，卜胚层点育不t