第5章第6节保存精液.pptVIP

第5章 家畜繁殖技术;精液保存的意义;现行的精液保存方式有3种，即常温(15～25℃)保存、低温(0～5℃)保存和冷冻(-79～-196℃)保存。常温和低温保存是液态，故称液态保存。;（一）精液的常温保存;1.保存原理利用酸性环境抑制精子的活动，使其营养物质消耗减少，一旦PH恢复到7.0左右，精子还可以复苏，保持其受精能力。通过在稀释液中加入酸性物质，创造酸性环境，同时利用抗生素抑制微生物的繁殖，可以使精液保存一定时间。在一定范围内是可逆抑制，通常把pH调整到6.35左右。;2.稀释液配方(见课本128页) ;（二）精液低温保存（保存温度0-5 ℃ ）;1.保存原理;2.保存方法;3.低温保存稀释液;（三）精液冷冻保存;1.精液冷冻保存的原理;（1）玻璃化假说;A.结晶态;B.玻璃态;(2)甘油保护学说;甘油又名丙三醇，分子式CH2（OH）－CH2（OH）－CH2（OH），为高热能脂肪家族，其3个羟基（OH）为亲水基团，可与精液中的水结合，限制和干扰水分子的晶格排列，而产生冰晶；其烃链为疏水基团，朝向精子，可阻止精子的内外水分相互渗透，从而使精子保护在玻璃化膜中。 但是，甘油浓度高时，对精子有危害作用，应掌握甘油的用量。一般牛冷冻精液中甘油通常加入5％～7％。 除甘油外，其他多羟化合物如二甲基亚砜(DMSO)、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、糖类等都具有抗冻作用。;2.精液冷冻保存稀释液配方（见课本）;3. 冷冻精液制作方法;3.降温平衡;4.精液的分装 现行冻精常采用颗粒、细管和袋装等分装方法。;精液的分装;5.冻结;(1)干冰埋植法 适合于小规模生产及液氮缺乏地区。 颗粒冷冻 把干冰置于木盒中，铺平压实，用预先做好的模板在干冰上压出直径0.5cm、深2～3cm的小孔，用滴管将平衡后的精液0.1ml左右滴人孔内，覆以干冰，2～4min后，收集冻精保存。 细管冻精冷冻 将分装的冻精平铺于压实的干冰上，并迅速用于冰覆盖，2～4min取出贮存于干冰或液氮中。 (2)液氮法 颗粒冻精 在广口液氮桶上安装铜纱网，调至距液氮面1～3cm，预冷几分钟后，使纱网附近温度达-80～-100℃，将精液均匀地滴压在铜纱网上，2～4min后，待精液颗粒充分冻结、颜色??浅发亮时，用小铲轻轻铲下颗粒冻精，每50～100粒装入纱布袋中，沉入液氮保存。 细管冻精 除按上述方法对细管进行熏蒸冷冻外，也可采用液氮浸泡法。把分装好的精液细管平铺于特制的细管架上，放人盛装液氮液氮柜中浸泡，盖好，5min后取出保存。这种方法启动温度低，冷冻效果好。;（三）冻精的贮存目前，冻精保存普遍采用液氮做冷源，以液氮罐为容器贮存和分发冻精。;1.液氮及其特性 液氮是空气中的氮气经分离、压缩形成的一种无色、无味、无毒的液体，沸点温度为-195.8℃。在常温下，液氮沸腾，吸收空气中的水气形成白色烟雾。液氮具有很强的挥发性，当温度升至18℃时，其体积可膨胀680倍。此外，液氮又是不活泼的液体，渗透性差，无杀菌能力。 基于液氮的上述特性，使用时要注意防止冻伤、喷溅、窒息等，用氮量大时要保持空气通畅，注意保护。 2.液氮容器 包括液氮贮运容器和冻精贮存容器，前者为贮藏和运输液氮用，后者为专门保存冻精用。当前冷冻精液专门使用的液氮罐型号较多，但其结构基本相同。;(1)罐壁 由内外两层构成，一般由坚硬的合金制成。 (2)夹层 指内外壳之间的空隙。为增加罐的保温性，抽成真空。真空度为1.33 X 10-4pa，在夹层中装有活性碳???硅胶及镀铝绦纶薄膜等，以吸收漏入夹层的空气，也增加了罐的绝热性。 (3)罐颈 由高热阻材料制成，是连接罐体和罐壁的部分，较为坚固。 (4)罐塞 由绝热性好的塑料制成，具有固定提筒手柄和防止掖氮过厦挥发的功能。 (5)提筒 存放冻精的装置。提筒的手柄由绝热性良好的塑料制成，既能防止温度向液氮传导，又能避免取冻精时冻伤。提筒的底部有多个小孔，以便液氮渗入其中。;3.液氮容器使用应注意的问题;随堂练习