血府逐瘀汤含药血清体外诱导骨髓基质干细胞成心肌样细胞的探究.pdfVIP

提 要 目的：探讨活血化瘀方血府逐瘀汤含药血清体外诱导大鼠骨髓基质干细胞分化 为心肌样细胞的可行性。 方法：分离培养Wistar 大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)，采用台盼兰排斥试验检 测 BMSCs 活力。用血府逐瘀汤含药血清诱导 BMSCs ，采用酶联免疫检测其活性。 诱导分化后，倒置显微镜观察细胞形态变化；用免疫细胞化学染色法检测结蛋白 （Desmin ），肌动蛋白（Actin ）和心肌肌钙蛋白（cTnI ）的表达、免疫细胞荧光染 色法检测心肌肌钙蛋白（cTnI ）的表达以及 RT-PCR 技术检测心肌细胞标志物 α-MHC，β-MHC 的表达。 结果：诱导 7 天后，骨髓基质干细胞形态变宽，呈长梭形、圆形和椭圆形并伸 出细长突起，突起末端出现分支，细胞排列方向渐趋一致；诱导4 周后，部分相邻 细胞的突起连接成网，可见管状结构。免疫细胞化学染色示结蛋白（Desmin ）、肌 动蛋白（Actin ）和心肌肌钙蛋白（cTnI ）呈阳性表达；荧光显微镜示心肌肌钙蛋白 （cTnI ）呈阳性表达；RT-PCR 结果示诱导后的细胞中有心肌细胞标志物 α-MHC， β-MHC 的表达。 结论：血府逐瘀汤含药血清可以体外诱导大鼠骨髓基质干细胞分化为心肌样细 胞。 关键词：血府逐瘀汤；含药血清；诱导；骨髓基质干细胞；心肌样细胞 The experimental research of differentiation from bone marrow stromal stem cells to cardiac-like myocytes by medicinal serum of Xuefuzhuyutang Speciality: Research on angionosis of brain and heart in the field of integrated TCM and Western Medicine Author: Qin Limei Tutor: Pro.Liu Liqing Abstract Objective: To disscuss Xuefuzhuyutang （a medical prescription of promoting blood circulation by removing blood stasis ）medicated serum differentiate rat bone marrow stromal stem cells into cardiac-like myocyte in vitro is feasible. Method: Use medicated serum of Xuefuzhuyutang to induct the Wistar rat bone marrow stromal stem cells (BMSCs) differentiation in DMEM/F12 culture fluid, detect the BMSCs’ vigor by trypan blue rejection test and OD value by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA).Then, to observe the cell shape with invert microscope; to identify the specific markers such as myocardial Desmin, Actin and cTnI with immunocytochemical staining; to identify myocardial cTnI with lmmunofluorescence method and to identify α-MHC and β-MHC of myocardial cell w