时间分辨免疫荧光法检测乙型肝炎病毒标志物.PDFVIP

时间分辨免疫荧光法检测乙型肝炎病毒标志物 罗开忠 杨旭 苏先狮 许允 李良友 中南大学湘雅二医院肝病研究中心 （湖南省 长沙市 410011 ） [关键词]肝炎病毒，乙型； 聚合酶链反应； 酶联免疫吸附测定； 免疫荧光 分析；时间分辨 Application of time-resolved fluoroimmunoassay in the detection of HBV markers. LUO Kai-zhong, Yang Xu, Su Xian-shi, Xu Yun , Li Liang-you 临床工作中发现少部分经酶联免疫吸附法 (ELISA)检测仅乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)和抗—HBc IgG阳性的患者，病毒含量却很高。为此，采用时间分辨免疫 荧光分析法(TRF)对34例此类患者进行乙型肝炎标志物(HBV M)的检查，现将结果 报道如下。 一、资料与方法 1.病例选择：为2002年2月至9 月住院或门诊患者，共34例，男2l例，女 13 例，年龄 5~58 岁，平均(29.2±18.7)岁。采静脉血分离血清，用 ELISA 进行 HBV标志物(HBV M)检测及HBV DNA定量检查。留取血清-30℃保存。 (1)HBsAg、抗-HBc lgG阳性，乙型肝炎e抗原(HBeAg)、抗-HBs：抗-HBe、抗-HBc IgM阴性； 4 拷贝／ml;(3)近3个月未使用抗病毒药物。每人进行2次抗 (2)HBV DNA含量＞10 原抗体检查，结果一致。2次HBV DNA检查，结果相差1个数量级以下。 2.常规 HBV M 检测：用 ELISA 法，试剂为上海科华生物工程股份有限公司产 品，按产品说明书操作。 3．HBV DNA含量测定：采用实时荧光定量PCR法，试剂盒购自广州中山医科 大学达安基因诊断中心.仪器为美国Perkin Elmer公司GeneAmp®PE5700型PCR仪。 严格按说明书操作，检测灵敏度为103 拷贝／mI。 4．TRF 法检查 HBV M：试剂为上海新波生物技术有限公司产品，采用 Anytest2000时间分辨检测仪。严格按照产品说明书操作。 5．统计分析：取HBV DNA含量的对数值进行成组设计的两样本均数比较，行 t检验。 二、结果 1．HBV M；用 TRF 法检查发现，34 例患者中 HBsAg、HBeAg、抗-HBc 均阳性 者 15 例，HBsAg、抗-HBe、抗-HBc 均阳性者 14 例，仅 HBsAg、抗-HBc 阳性者 5 例。即用ELISA检查时HBeAg假阴性15例，抗-HBe假阴性14例(表1)。 2．HBV DNA含量：HBeAg及抗-HBc均阴性组、HBeAg阳性组、抗-HBc阳性组、 HBv DNA含量的对数平均值分别为6．45±1．74、7．29±1．59、5．80±1．46。 将前者与后两组分别进行成组设计的两样本均数比较的t检验，t值分别为1．005、 0．816，P值均＞0．05，差异无显著性。 三、讨论 HBV M 的变化是评估 HBV 感染后病情转归的重要依据，也是抗病毒治疗的疗 效考核指标之一。通过 TRF 检查发现，大部分 ELISA 法检测为 HBsAg、抗-HBc 阳 性模式的患者其实为HBeAg假阴性(15／34，44．12％)及抗-HBe假阴性(14／34， 4I．18％)。仅少部分可能为病毒变异的结果。研究发现,HBsAg、抗-HBc 浓度显 著高于正常，ELISA 及 TRF 符合率为 100％，抗-HBs 浓度明显低于正常，两者符 合率为100%。而HBeAg、抗-HBe浓度仅稍高于正常，因此ELISA易出现假阴性。 目前TRF主要用于激素的检测。随着仪器及试剂的国产化，检测费用的降低，TRF 因其突出的高敏感性、特异性强、无放射污染等特点，在 HBV M 的检测中有着广 泛的应用前景。 表 1 时间分辨免疫荧光分析法检测乙型肝炎标志物结果（X ±S） 乙型肝炎标志物 参考值 样本数