中药淡豆豉异黄酮类化合物的超声循环提取.docxVIP

兰州文理学院学生论文题 目：中药淡豆豉异黄酮类化合物的超声循环提取作 者： 李 培 东 化 工 学院 系应用化学 专业 2013级年制 2 班2016年 5 月 20 日中药淡豆豉异黄酮类化合物的超声循环提取摘要：在超声循环条件下，探讨从中药淡豆豉中提取总异黄酮的工艺。以淡豆豉中总异黄酮提取率为评价指标，考察了不同固液比、提取温度、乙醇体积分数、超声时间、超声次数、超声功率对总异黄酮提取率的影响。通过单因素实验和正交实验L9（34）确定的最佳工艺条件为：提取温度50e，乙醇体积分数为60%，超声功率800W，超声时间90（30，30，30）min。按最佳工艺扩试3次，淡豆豉中总异黄酮平均提取率达1.6966%，相对标准偏差（RSD）为2.0%（n=3）。关键词：淡豆豉；大豆素；异黄酮；超声循环提取；中药现代化技术淡豆豉（SemenSojaepraeparatum）由豆科植物大豆的成熟种子和青蒿、桑叶等经发酵加工而成，为常用中药，历版5中国药典6均有记载。它具有解表除烦、宣发郁热等功效，常用于感冒、头痛、胸闷、虚烦不眠等症，具有抗骨质疏松、保护血管、降血糖、降血脂、抗更年期综合症等多方面的作用[1]。淡豆豉中异黄酮类物质为活性成分[2]，为对药材进行合理的开发利用，需要寻找一种提取淡豆豉总异黄酮的经济、高效方法。中药现代化重要内容之一就是中药提取过程的现代化。传统的水提法耗时、耗能、提取产率低。现代利用外场、外力强化和辅助提取，如微波法[3]、超声波法、超临界流体萃取法等[4]，是提高提取速度和效率的需要。超声循环提取技术中，超声波强化了溶出成分从细胞内向细胞外的扩散；循环技术使药用成分在提取介质中快速达到浓度平衡，可大大缩短提取时间，提高产品质量；该技术是当前浸出提取中最具前途的提取技术。目前，关于淡豆豉中异黄酮类化合物提取工艺的研究较少，窦玉红等[3]曾以染料木素含量为指标，对淡豆豉进行了热回流提取研究。本研究以大豆素（daidzein）为对照品，用超声循环技术对淡豆豉中异黄酮类化合物进行提取，确定了影响提取效果的主要因素和超声提取异黄酮的优化工艺条件，旨在寻找快速、高效提取淡豆豉中总异黄酮的方法[5,6]。1 实验部分1.1仪器与原料λ-2紫外分光光度仪（美国PE公司）；SY-1000超声循环提取机（北京弘祥隆生物技术开发有限公司）；旋转蒸发仪RE-52A（上海亚荣生化仪器厂）；电子天平BS223S（德国Sartorius公司）。淡豆豉购自石家庄乐仁堂药店，经河北医科大学药学院生药教研室赵丁教授鉴定，粉碎，过80目筛。大豆素（Sigma公司），其他试剂均为AR。1.2总异黄酮含量的测定测定波长的选择：用C（NaOH）=0.01mol/L的水溶液溶解淡豆豉提取物和大豆素对照品，并用空白试剂做参比，进行定性实验，发现二者在K=259.0 nm处均有最大吸收峰。因此，选择259.0 nm为测定波长。标准曲线的制作：精密称取真空干燥24 h的大豆素对照品5.8 mg，用C（NaOH）=0.01mol/L的水溶液溶解，容量瓶中定容至100 mL，摇匀。分别取0.50、0.80、1.10、1.40、1.70 mL置10 mL容量瓶中，加C（NaOH） =0.01 mol/L的水溶液定容至刻度。用空白试剂做参比，在259.0 nm测定相应的吸光度。以吸光度为横坐标，大豆素的质量浓度（μg/L）为纵坐标，进行回归分析，得到标准曲线方程：ρ=15.246A-0.1576（R=0.9996）。总异黄酮含量测定：取符合实验要求的淡豆豉，精密称取50 g。加正己烷200 mL超声振荡脱脂25min，弃去正己烷，重复一次。按标准曲线，用空白试剂做参比，在259.0 nm测定相应的吸光度。带入大豆素标准曲线方程得出质量浓度，并计算提取率。1.3 正交实验单因素选择根据淡豆豉及异黄酮类化合物的理化性质，进行单因素分析。考察不同固液比、乙醇体积分数、超声时间、超声次数、提取温度对淡豆豉总异黄酮提取率的影响，优选最佳单因素水平。1.4 正交实验优选最佳提取工艺选取提取温度（A）、乙醇体积分数（B）、超声功率（C）、超声时间（D）为主要考察因素，各因素及水平设置见表1。用L9（34）正交表进行正交实验。表1 因素水平表LevelA/℃B/%C/WD/min1305040030(10,10,10)2406060060(20,20,20)3507080090(30,30,30)1.5 方法学考察(1) 重复性实验：取5份供试品溶液0.10 mL，按标准曲线，用空白试剂做参比，在259.0 nm测定相应的吸光度。RSD=0.19%。(2) 稳定性实验：取对照品溶液及供试品溶液，于室温分别放置0、15、30、60、120、240 min，测定对照品溶