溶剂胶束作用对葡萄糖氧化酶催化活性的影响.pdfVIP

2008年 lO月 保 定 学 院学 报 0ct．2008 第21卷第4期 J0URNA 【．OFBAODINGUNIVERSITY V0l-2lNo-4 【化学研究 】 溶剂胶束作用对葡萄糖氧化酶催化活性的影响 翟彤宇，刘伟华 (河北农业大学 理学院，河北 保定 071001) 摘 要：研究6种溶剂和表面活性剂对葡萄糖氧化酶催化活性的影响．研究表明，30％丙酮溶液 对反应体系有激活作用，可使葡萄糖氧化酶测定葡萄糖的反应速率加快、灵敏度提高，线性范围达 到O．O0～10．O0g，L，同时确定了最佳反应条件．研究结果对于优选新的激活剂具有一定的实际意义． 关键词：葡萄糖氧化酶；葡萄糖；丙酮；胶束；表面活性剂 中图分类号：Rll5 文献标识码：A 文章编号：1674—2494(2008)04—0001—04 葡萄糖氧化酶(G1ucoseoxydas，GOD)分子通常~2--聚体的形式存在，其氧化还原活性中心是黄素腺嘌 呤二核苷酸(FAD)，它是一种需氧脱氢酶，能以02作为自然媒体，催化葡萄糖氧化成葡萄糖内酯和过氧化氢， 在食品工业、临床分析及葡萄糖传感器…方面应用非常广泛；其重要用途之一是测定血液葡萄糖、诊断糖尿 病．葡萄糖氧化酶法检测葡萄糖特异性好 、灵敏度高、准确性好 ，是国际公认的分析技术I2-31；1956年后，国外 开始大量使用酶法测定血液葡萄糖，我国从1960年开始研究，实现了GOD国产化，但国产血糖酶试剂反应速 度比进口产品慢3～5倍，价格又偏高，无法替代进El产品用于 自动分析仪的快速测定．国外试剂一般利用加大 酶的用量或加入变旋酶(Mutaroctase)增~IIGOD酶偶联反应的速率 ，但是成本更高． 传统的 “酶学”是以研究水溶液中的酶反应为基础的，然而 自然界中的酶通常附着在生物膜上．近年来 “胶束酶学”研究表明，有机溶剂对酶促反应有一定增溶、增速、增敏作用[51；由有机溶剂和表面活性剂等构成 的胶束和逆胶束系统适合膜的存在，故胶束又可作为酶反应的微观不均匀性的媒介物和控制分子大小的反 应器，可模拟天然酶在细胞中的介质微环境，有利于保持酶的催化构象，使酶表现出远高于它在水中的 “超活 性” ；阳离子表面活性剂对DNA及酶等大分子聚合物有增溶、分离、纯化作用8[1，利用胶束增敏作用可以使 GOD活性增加19-1Ol，有利于反应的进行．因此，利用 “胶束酶学”研究溶剂或表面活性剂对GOD的影响，是提高 国产血糖酶试剂性能的有效途径．本文研究6种有机溶剂和表面活性剂对GOD活性的影响，对有激活作用的 试剂进行深入研究，优化了反应条件． 1 材料与方法 1．1 仪器与试剂 756PC紫外可见分光光度计，501超级恒温水箱，pHS一3C数字酸度计． 葡萄糖氧化酶(河北省科学院微生物研究所，8000U／mL)；过氧化物酶(中国科学院上海生物化学研究 所)；葡萄糖标准液(北京北化精细化学品有限责任公司，1．ooog／L)；酶试剂 ：O．1g4一氨基安替吡啉，6．6mg过 氧化物酶，1．4mL葡萄糖氧化酶溶于1L磷酸盐缓冲液 (pH=7．0~0．05)，测定时再与苯酚水溶液(1g／L)等量混 合．十二烷基硫酸钠(SDS)：l15mg／L；聚乙烯吡咯烷酮：0．63g／L；体积比为lO％的丙三醇水溶液；体积比为50％ 的乙醇、乙醚水溶液；体积比为l0％～70％的丙酮水溶液；试验用水为蒸馏水，试剂为分析纯． 1．2 实验方法 取2支试管，一支为对照管，另一支为测定管．对照管中加入3．00mL蒸馏水配制的酶试剂，测定管中加入 收稿 日期：2008—06—29 基金项 目：河北省科技厅科技攻关计划项 目“血糖检测酶试剂激活剂的研究”(052255o4) 作者简介：翟彤宇(1957一)，女 ，河北满城人，教授． 2 保定学院学报 2008年第4期 3mL用115mg／LSDS溶液代替水配制的酶试剂，室温条件下 ，各加入1．000g，L葡萄糖标准液40．0uL，迅速混 匀转入O．5cm比色杯，以各试剂空白溶液调零，立即在h=505n