基于光谱法的酸性红92结合牛血清白蛋白的研究 - 西华师范大学学报 .pdfVIP

第３７卷 第４期 西 华 师 范 大 学 学 报 （自然 科 学 版 ） ２０１６年 １２月 　 Ｖｏｌ３７ Ｎｏ４ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＷｅｓｔＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ） Ｄｅｃ．２０１６ 文章编号：１６７３５０７２（２０１６）０４０３９６０７ 基于光谱法的酸性红９２结合牛血清白蛋白的研究 曹丽君，程正军，李　田，蒋晓慧 （西华师范大学 ａ．化学化工学院；ｂ．四川省化学合成与污染控制重点实验室，四川 南充　６３７００９） 摘　要： 通过荧光光谱、紫外可见光谱（ＵＶｖｉｓ）及傅里叶变换红外光谱法（ＦＴＩＲ）研究牛血清白蛋白（ＢＳＡ）与酸 性红９２（ＡＲ９２）之间的相互作用。研究表明ＡＲ９２对 ＢＳＡ的荧光猝灭为静态猝灭。位点标记实验证明ＡＲ９２结合 ０ ０ ０ 于 ＢＳＡ上的位点 （子域 Ａ）。热力学参数 Ｇ ＜０， Ｈ ＜０， Ｓ＞０暗示 ＢＳＡ与 ＡＲ９２间结合是以静电力为主 Ⅰ Ⅱ △ △ △ 要驱动力的自发放热过程。而且，还探讨不同盐浓度和乙醇对其结合作用的影响。此外，分析 ＡＲ９２诱导 ＢＳＡ的 构象变化。 关键词： 光谱法；牛血清白蛋白；酸性红９２；荧光猝灭；构象变化 中图分类号：Ｏ６５　　　文献标志码：Ａ　　　　ＤＯＩ：１０．１６２４６／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３５０７２．２０１６．０４．００７ ［１］ ［２］ 酸性红９２（ＡＲ９２，图１）是一种人造種吨着色剂，它已被用在食品、药物和化妆品等领域 。Ｑｉ等 研究 发现，过量的ＡＲ９２会诱导细胞坏死和引发炎症反应。因此，研究 ＡＲ９２与蛋白质的相互作用具有重要意义。 血清白蛋白（ＳＡ）是循环系统中的主要可溶性蛋白成分，作为转运蛋白来转运药物、脂肪酸和末端氨基树枝 ［３］ 状聚合物等多种物质 。由于牛血清白蛋白（ＢＳＡ）易于纯化和成本低，并且它与人血清白蛋白（ＨＳＡ）有 ［４］ ７６％的相似性，因此，ＢＳＡ已被广泛用作一个模型来评估蛋白质与有机小分子间的相互作用 。近年来，关 于有机小分子与蛋白质相互作用的研究已成为化学生物界研究热点之一。然而，ＡＲ９２与 ＢＳＡ结合特性尚 不明确。故本文运用多光谱法探讨 ＢＳＡ和 ＡＲ９２间相互作用，该研究可能为 ＡＲ９２作为食品着色剂等方面 提供有用信息。 １　实验部分 １．１　材料 牛血清白蛋白（ＢＳＡ，纯度 ９８％，Ｍｒ＝６８０００）购自Ｒｕｉｂｉｏ公司， 使用时未纯化。ＢＳＡ溶液用０．０５Ｍ磷酸盐缓冲液（ｐＨ＝７．４）配制。 ＡＲ９２购自麦克林生物化学有限公司（中国，上海）。其它化学品均 为分析纯。所有溶液均在４℃下储存，整个实验使用的水均为二次 蒸馏水。 １．２　方法 所有荧光光谱均用配有恒温槽的ＣａｒｙＥｃｌｉｐｓｅ型荧光分光光度 计（美国，瓦里安）进行测定。ＢＳＡ的浓度为２．０ Ｍ，ＡＲ９２的浓度从０增加到 １．９４ Ｍ。激发和发射狭缝宽 μ μ 均为５ｎｍ，激发波长２８０ｎｍ，波长范围３００～５００ｎｍ。所有荧光滴定实验均用５０ Ｌ手动微量注射器完成。 μ 在存在和不存在盐（０．３０、０．６０、０．９０Ｍ）或乙醇（５％和 １０％，Ｖ／Ｖ）的磷酸盐缓冲液（０．０５Ｍ，ｐＨ＝７４） 中进行盐和乙醇对 ＢＳＡ与ＡＲ９２相互作用影响的荧光滴定实验。 同步荧光光谱激发和发射波长的间隔 分别为 １５ｎｍ和６０ｎｍ，波长范围均为２５