使用体积排阻和反相uplc分析peg修饰的蛋白 - waters.pdfVIP

[ 应用纪要 ] 使用体积排阻和反相UPLC分析PEG修饰的蛋白 Stephan Koza和Kenneth J. Fountain 沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德市) 应用优势 简介 ■ 本应用纪要展示了两种UPLC® 方法 — 1990年，首款PEG修饰生物治疗药物 — 培加酶问世，它是源自牛科动 SE-UPLC和RP-UPLC，用于分析蛋白PEG修饰 物的腺苷脱氨酶与分子量(MW)为5 KDa的聚乙二醇(PEG)的生物偶联物。 过程中的PEG-蛋白偶联物、非PEG化蛋白 培加酶可用于治疗患有重症联合免疫缺陷病(SCID)的患者。2012年， 以及游离活化PEG水平。 共有10种PEG修饰生物偶联药物经批准可在市场上销售，而其它的此类 药物尚处于临床研究阶段1 。PEG修饰的最大优势之一是能够改善生物 ■ SE-UPLC能够快速获得PEG修饰蛋白与未 治疗药物的药代动力学特性及稳定性。但是，有趣的是，有报道称大 修饰蛋白的高度分离。根据分析物流 约25%的正常健康人群都有带有针对PEG 的抗体效价，而导致该结果的 体动力学粘度半径的理论计算结果可 原因可能是此类化合物在个人护理产品中的普遍使用。在PEG偶联物的 预测SE-UPLC应用于该分析的可行性。 2, 3 临床应用中也发现有抗PEG抗体的形成 。由于PEG修饰生物偶联物的 疗效和潜在安全性问题都取决于它们的PEG修饰程度，因此这就成为了 ■ 在本应用中RP-UPLC根据疏水性差异分 离PEG-蛋白偶联物、非PEG修饰蛋白以 我们必须重点监测的关键质量属性。 及游离aPEG 。 分离PEG修饰蛋白可使用离子交换色谱(IEC)、体积排阻色谱(SEC)以及 4 反相色谱(RPC)等多种方法 。在本应用中，我们采用SEC (SE-UPLC)和RPC (RP-UPLC)这两种UPLC配置评估了50 KDa分子量的蛋白、40 KDa 的活化PEG (aPEG)以及偶联物这三种物质的分离，因为这两种方法均易于建立， 且能够完全兼容蒸发光散射检测器(ELSD)。根据此前将SEC用于该类分 5 析的报道 ，该应用类型的SEC模式分离最终能否成功，应取决于三种 组分的流体动力学粘度半径以及它们的多分散性。在本应用中，RPC分 沃特世解决方案 离是否能成功取决于三种组分的疏水性差异。 ACQUITY UPLC®蛋白分离技术(PrST) 色谱柱 配备ACQUITY UPLC TUV和ACQUITY UPLC ELSD 的ACQUITY UPLC H-Class Bio系统 关键词 体积排阻色谱，SEC，单克隆，蛋白， SE-UPLC，凝胶渗透色谱，聚乙二醇， PEG，PEG修饰蛋白，反相色谱， RP-UPLC