环境微生物试验.pdfVIP

環境微生物實驗 畫碟法.倒碟法.塗抹法 原理 1. 概述微生物的培養可以分為混合跟純種培養 混合培養是利用一種以上微生 物(混合菌種)進行培養 可以表現群體生存的共同特性 環境工程中二級處理廢 水時活性污泥之生長.衛生掩埋法進行固體廢棄物的處理為混合培養的典型 實例.而純種培想是以單一微生物菌種及其衍生物生細胞進行之 而純種培養方法主要 (1) 增值培養 用調整的培養條件 以便篩選某種特殊微生物的過程稱為增殖培養 也是 一個純種培養的重要步驟之ㄧ 可仰制一些會干擾培養過程之微生物生 長. (2) 分離 經由增值步驟可將想研究的於選擇性培養機中大量繁殖 然而可能有少 數其他菌種存於其中 無法完成純化因此有必要進一部利用分離技術把 微生物分離成獨立菌落 達成純種培養. 1. 倒碟法:又稱為混合稀釋法 先以接種環或吸管進行連續稀釋 接著各 取 1ML 稀釋菌連同 40 到 50 度溶融狀態的固體培養基一起置入已滅 菌的培養液一齊治入已滅菌的培養皿中 等凝固後置於恆溫培養箱 培養即可獲得最佳分離效果 並可用於微生物的記數 2. 畫碟法;利用接種環將待分離的樣品均勻劃於固體培養基表面 如此 可將混合 如此可將混合生長的菌落分離成單一菌落 達到純種培養 的目的 3. 塗抹法;地入幾滴菌液再培養皿再利用三腳彎棒塗抹菌液在固體培 養基上 2. 大量培養包含批次培養跟連續培養 (1) 批次培養;在營養有限的情況下培養為生物 因此微生物生長有限而活性 也不能維持太長的時間 (2) 連續培養;可以不斷有新的營養援助入培養皿中還有代謝物質會定時排 出 所以菌體可以保持活性和新鮮度 步驟 -1 -2 -3 -4 -5 塗抹法：將菌液稀釋為 10 、10 、10 、10 、10 ，取0.1ml 固定量滴至培養基中央 ， 將三角彎棒沾取酒精後微微過火一下，在培養皿蓋子稍微塗一下，在 o 將培養基中的菌液塗抹均勻，放至 37c培養箱培養 。以 30～300 個菌為 主 。 -1 -2 -3 -4 -5 倒碟法：將菌液稀釋為 10 、10 、10 、10 、10 ，取0.1ml 固定量，之後先配置培 養基，因需做5 培養皿，所以取 125ml 二段水及 2.875g的豐富培養基 o 配製 ，等培養基配製完成後冷卻至 40 c左右 ，與固定量的菌液一起混 和均勻，放置 37c的培養箱培養 。o 劃碟法：拿取 5 個培養基，將接種環燒烤至火紅色 ，在將接種環放入菌液裡面 ， 在劃碟時要注意路徑不要重複 ，完成第一次劃碟時接種環還要在火燒 一次，劃之前先在空白的培養基降溼 ，在以第一次劃碟的部份作為菌 的來源 ，在劃第二次，依序做完 5 個培養基 。 實驗器材設備及水樣來源 設備 ：微風培養箱、高溫高壓滅菌釜 、電子天平 器材 ：5 支試管、酒精燈及酒精 、打火機、燒杯 、三教彎棒、接種環、10 個培養皿 （含培養基 ）、定量玻璃吸管及吸球 培養基部分：5 個空的培養皿 （用 125ml 二段水及 2.875g的豐富培養基配製） 、 取藥杓 、隔熱手套、秤藥紙 、錐型瓶 取樣來源 ：實驗室外水池