ardra 方法在荧光假单胞菌分离鉴定中的应用 - 中国农业科学.pdfVIP

中国农业科学 2007,40(1):92-98 Scientia Agricultura Sinica ARDRA方法在荧光假单胞菌分离鉴定中的应用 1，2 1 1 1 1 2 年洪娟 ，张 杰 ，樊利强 ，刘 朔 ，宋福平 ，黄大昉 1 2 （中国农业科学院植物保护研究所/植物病虫害生物学国家重点实验室，北京 100094 ； 中国农业科学院生物技术研究所，北京 100081 ） 摘要：【目的】探索荧光假单胞菌的分类方法，分离筛选拮抗性较强的荧光假单胞菌。【方法】利用紫外下产 生荧光的特性，采用梯度稀释及鞭毛染色的方法，对采自云南、海南、山东和新疆的 488 份植物根际土壤进行分 离筛选，分离菌株进行 ARDRA 分析，采用室内平板对峙法筛选对植物病原真菌具有较强拮抗作用的菌株，并对其 进行生理生化分析和分子鉴定。【结果】分离筛选到102 株紫外下产生荧光的杆状单极生鞭毛菌株。ARDRA分析产 生荧光假单胞菌类型、恶臭假单胞菌类型以及一个未知的谱带类型。以油菜立枯病菌作为靶标菌，筛选到25株具 有拮抗作用的菌株，其中 TC222 产生的抑菌圈最大，进一步的生测结果表明该菌株对 9 种重要的植物病原真菌如 番茄灰霉病菌等具有很强的拮抗活性。TC222的 16S rDNA核苷酸序列与荧光假单胞菌PfO-1同源性达到99%，其 最终鉴定为荧光假单胞菌。【结论】ARDRA方法在分子水平上为荧光假单胞菌的分离鉴定探索了一条新途径；TC222 菌株具有拮抗多种植物病原真菌的能力，显示了良好的应用前景。 关键词：荧光假单胞菌；分离鉴定；ARDRA分析；拮抗作用 Application of ARDRA Technology in Pseudomonas fluorescens Isolation and Identification 1,2 1 1 1 1 2 NIAN Hong-juan , ZHANG Jie , FAN Li-qiang , LIU Shuo , SONG Fu-ping , HUANG Da-fang 1 ( State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests, Institute of Plant Protection, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100094;2 Biotechnology Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081) Abstract: 【Objective 】The study isolated strongly antagonistic P. fluorescens . 【Method 】 Fluorescence under UV and flagella staining were used to isolate fluorescent pseudomonas from 488 soil samples collected from Shandong, Hainan, Yunnan and Xinjiang Provinces. About 1.5 kb 16S rDNA fragments of these strains were amplified with 16S rDNA p