新型血清型1型重组腺相关病毒载体携带血管内皮生长 - 五加和研究所.pdfVIP

维普资讯 2007年 1月第 35卷第 1期 ChinJCardiol !， ： ： · 69 · ． 基 础 研 究 新型血清型 1型重组腺相关病毒载体携带 血管 内皮生长因子基因促血管生成的实验 研究 鄢华 吴小兵 郭艳红 张鹏 陈莉 董小岩 王贵松 高炜 【摘要l 目的 探讨采用腺相关病毒血清型 1型的衣壳蛋白构建的 “假毒粒”型重组腺相关病 毒 (rAAV)1载体介导血管内皮生长因子 (VEGF)促血管新生的可行性、有效性。方法 以每个细胞 10vgrAAV1．绿色荧光蛋白(GFP)及rAAV1-VEGF载体量感染 C2C12细胞 (小鼠成肌细胞)分化的肌 管，荧光显微镜下观察 rAAV1-GFP的转染效率。ELISA法检测 rAAV1-VEGF转染后细胞上清中 VEGF表达量。构建小鼠后肢缺血模型，术后 10天每只小 鼠股部缺血骨骼肌内注射3×10“vg的 rAAV1-VEGF载体，载体转染后 1个月ELISA法检测小鼠缺血骨骼肌中VEGF蛋白表达量。载体转 染后6周免疫组化检测小鼠缺血骨骼肌中毛细血管及小动脉新生情况。结果 rAAV1．GFP感染后 120h60％～80％的肌管可表达GFP。rAAV1-VEGF载体感染后第3天细胞上清中分泌的VEGF表达 量达到高峰，VEGF浓度为(567．7 ±16．8)ps／ml。小鼠缺血骨骼肌中rAAV1．LacZ载体转染后 1个 月转染效率可达 100％。rAAV1-VEGF载体转染后 1个月平均VEGF浓度为 (205．4 ±36．1)pg／mg 总蛋白，与对照组相比差异有统计学意义 (P0．O1，n=5)。rAAV1-VEGF载体转染有效促进了血 管新生 (P0．001，n=6)，载体转染6周缺血骨骼肌中毛细血管计数与小动脉计数分别为(147．0± 13．3)／lIlIn，(17．0±1．2)／lIlIn。结论 新型 “假毒粒”型rAAV1-VEGF载体可能是治疗缺血性心血 管疾病更为优越的基因治疗载体。 【关键词】 新生血管化，生理性； 血管； 内皮生长因子； 腺相关病毒 Theinvivoandinvitroeffectson ofVEGFgenetransferwithanew pseudotyped rAAV1vector Hua ‘，聊 ∞-bing，GUO Yan-hong，ZHANG ng，CHEN Li，DONGXiao-yan， WANGGui-song，GAO D‘epartmentofCardiology，PekingUniversity77I Hospital，Be~iing100083， China Corresponding 口 r：GAO ．Email：drgaowei@ yahoo．com _ 【Abstract】 Objective Toinvestigatetheeffectsofvascul~endohtelialgrowthfactor(VEGF)gene transferwiht anewpseudotypedrecombinantadeno．ass~iatedvirus(rAAV)vectorwiht AAVserotype1 ea~idprotein (rAAV1)vectoronneovascularizatiorLMethods PBS．rAAV1．Gl nadrAAV1．VEGF vcetorswereaddedinC2C12derivedmyotubes[10vg(vcetorgenomes)percel1]．Transferefficiencywas determinde byfluorescentmicroscope nad VEGF protein concentration inthe culturemdeia measured by Eu