蝎毒多肽抑制白血病干细胞龛内活化的实验研究 - 天津中医药.pdfVIP

20 11 年8 月第28 卷第4 期 天 津 中 医 药 Aug． 2011,Vol．28 No．4 Tianjin Journal of Traditional Chinese Medicine 329 蝎毒多肽抑制白血病干细胞 龛 内 活 化 的 实 验 研 究* 杨向东，杨文华，史哲新，刘宝山，高 宏，张 蕾，陈艳鑫 （天津中医药大学第一附属医院血液科，天津 300193) 摘要：[ 目的] 观察蝎毒多肽（PESV）抑制白血病干细胞（LSC）在骨髓龛内的活化效应。[方法] 分离白血病/急性淋 巴细胞白血病（AML/ALL）患者LSC ，置于Transwell 小室中，分为高中低剂量组及对照组，分别加入不同浓度蝎毒多 肽后培养，计算不同浓度组及不同时间段的LSC 迁移率。[结果] PESV 组迁移率分别为（25.01±6.83）%、（36.85±3.83）%、 （50.73±7.15）% ，与对照组（49.10±6.12）% 比较差异具有显著性（P 0.05），高剂量组迁移率高于中低剂量组。[结 论] 不同浓度PESV 均有抑制白血病干细胞活化作用，抑制强度呈浓度依赖。 关键词： 蝎毒多肽；白血病干细胞；龛；活化效应 中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1672-1519(2011)04-0329-03 随着白血病治疗方法不断进步，治愈白血病面 之间者符合本实验要求。收集PESV 蛋白峰，临用时 临最大问题不是如何获得骨髓形态学缓解，而是如 PESV 用生理盐水溶解稀释成各浓度。 何清除患者体内白血病干细胞（LSC）。笔者研究的蝎毒 1.3 主要试剂及仪器 RPIM－1640 （Gibco 公司）， 多肽（PESV）是从东亚钳蝎蝎毒中分离和纯化的提 青霉素、链霉素（Hyclone 公司），环磷酰胺（CTX，江 取物，是一种细胞毒成分，具有较强的协同化疗药 苏恒瑞医药股份有限公司），类标准胎牛血清（兰 物杀伤白血病干细胞作用。近年研究表明其协同作 州民海生物公司），Transwell 板（Corning 公司）， 用机制之一是抗白血病干细胞多药耐药。 Matrigel 凝胶（BD 公司），抗肿瘤坏死因子（TNF－α）， 1 材料 （Peprotech 公司），胰蛋白酶（Hyclone 公司），锥虫蓝 1.1 标本及白血病干细胞株 2010 年1— 12 月，本 （Amresco 公司）。 院收治的初发及复发急性白血病（AL）患者35 例， 2 方法 男19 例，女 16 例，平均年龄39．6 （14～80）岁。急性 2．1 绘制生长曲线 锥虫蓝染色，选取活细胞数95% 5 非淋巴细胞白血病（ANLL）23 例（其中慢性粒细胞 的病例。调整待用细胞悬液细胞数至5×10 个/mL ， 白血病急粒变6 例，ANLL－M 3 例，ANLL－M 10 例， 接种于24 孔板，每天用锥虫蓝染色计活细胞数，连 5 2 ANLL－M4 4 例），急性淋巴细胞白血病（ALL）12 例。 续7 d ，绘制生长曲线。 初发21 例，复发 14 例（复发患者至少半个月以上 2．2 锥虫蓝实验 选取对数生长期的细胞悬液，调 5 未用化疗）。无菌操作留取骨髓标本各3 mL ，肝素抗 整浓度至5×10 个/mL ，180 μL 接种于96 孔板，分为 凝，经磁珠分离法