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人血浆中糖尿病治疗性多肽药艾塞那肽的定量分析

人血浆中糖尿病治疗性多肽药艾塞那肽的定量分析 ——QTRAP ® 5500 MRM 3功能用于复杂混合物的高选择性定量分析 Yan Xu, John Paul Gutierrez, Tian-Sheng Lu, Haiqing Ding, Katie Piening, Erin Goodin, Xiuying Chen, Kristin Miller, Yong-Xi Li Medpace Bioanalytical Laboratories, Cincinnati, OH 随着治疗性生物药物日益受到重视,药物研究工作者对使用 LCMS进行蛋白和多肽定量分析越来越感兴趣。艾塞那肽是一种大 分子治疗多肽,目前已被批准用于治疗 型和 型糖尿病。该多肽 1 2 可增强胰腺β细胞分泌葡萄糖依赖胰岛素,以调节糖代谢和胰岛 素分泌。 近年来,血浆中艾塞那肽的浓度测定主要通过配体实验来完 成,例如利用酶标免疫测定法进行艾塞那肽的药代动力学研究。 但是,由于某些具有相似理化性质的化合物的存在,致使酶标免 疫测定法缺乏足够的特异性和选择性,导致采用该方法分析将面 临一定的风险。基于上述原因,本文使用AB SCIEX QTRAP® 5500 图 艾塞那肽的结构。艾塞那肽是由 个氨基酸组成的多肽( 1. 39 MW 系统评估了MRM3 方法在提升人血浆中多肽测定选择性方面的作 =4186.6 Da ),是糖代谢和胰岛素分泌的调节剂。 用。 使用MRM3方法定量大分子治疗多肽的主要特点 模式下产生第一级碎片。因为 中进行第一级碎裂时不存在低 Q2 3 质量端歧视效应,并且能使用更高的碰撞能量,因此能够达到 • 采用MRM 方法中的多级碎裂功能,可达到更高的选择性。 更高的速度,更大的选择性及灵活性。 • 由于QTRAP® 5500 系统的改进,能够进行更快更灵敏的MRM3 分析。 3 实验方法 • 使用MRM 方法分析可降低标准曲线低浓度端的干扰,从而提 高复杂基质中样品的检测限。 样品制备:提取人血浆中的艾塞那肽,用氮气吹干,复溶。 3 ® 在所有的操作步骤中,仔细控制 值及有机相。 与传统离子阱 扫描不同, 独特的三重四极杆 线性 pH • MS QTRAP - 离子阱的设计允许 选择母离子(单位分辨率), 在传输 Q1 Q2 图 采用 进行 3定量分析。首先在 四极杆中选择母离子,然后在 碰撞池中碎裂,子离子在线性 2. LCMS MRM Q1 Q2 离子阱中富集并分离,接着通过激发产生第二级碎片,然后将第二级碎片离子扫描至检测器。 p 1 液相色谱条件: • Shimadzu UFLC LC-20ACXR EMS • 反相色谱柱C-18 2.0 x30mm ,5u • 流速:0.6mL/min • 进样体积:5µL 流动相 :含 甲酸的水溶液 • A 0.1% 流动相 :含 甲酸的甲醇溶液 • B 0.1% 梯度:在

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