大肠杆菌中表达和纯化水稻穗颈伸长基因(eui2)及其编码蛋白.docVIP

在大肠杆菌中大量制备和纯化水稻环氧化物酶 汪社亮1 3，柳参奎2 ，玉光惠，巩鹏涛 ，赵德刚，方宣钧 海南省农作物分子育种重点实验室，海南省热带农业资源开发利用研究所三亚572025, 中国 东北林业大学盐碱地生物资源环境研究中心, 哈尔滨, 150040中国 贵州大学生命科学院, 贵州省农业生物工程重点实验室, 贵阳, 550025，中国 通讯作者及电子邮箱 作者电子邮箱 基因组学与应用生物学，2010年，第30卷，第1期 DOI: 收稿日期：2010年7月28日 接受日期：2010年8月15日 发表日期：2010年9月10日 这是一篇开放阅取的论文，其论文发布和传播接受《Creative Commons Attribution License》所有条款。只要对本原作有恰当的引用，版权所有人允许和同意第三者无条件的使用、传播以及任何媒介的复制或再制作。本文首次发表在Bioscience Methods开放取阅期刊上。本文是依据《Creative Commons Attribution License》协议，用中文再次发表与传播，如果读者对中文含义有歧义，请以英文原文为准。如果任何人要引用本研究内容，建议的引用格式如下：Large Preparation and Purification of Rice Epoxide Hydrolase Expressed in Escherichia coli, Bioscience Methods, Vol 1. No. 2, doi: 10.5376/bm.2010.01.002 摘 要我们反转录PCR水稻基因组cDNA文库OsEH1基因，重组质粒pQE-30+ OsEH1质粒转入大肠杆菌E. coliM15 细胞中含有6个His标签的融合蛋白6xHis-OsEH1。IPTG浓度和培养温度6xHis-OsEH1融合蛋白表达利用Ni-NTA树脂亲和色谱柱通过改进表达和纯化过程，最终每升菌液可获得分子量为36Da的纯化的融合蛋白7.46 mg满足蛋白活性鉴定和抗体制备等工作。 关键词 环氧化物酶OsEH1基因蛋白纯化大量制备 Large Preparation and Purification of Rice Epoxide Hydrolase in Escherichia coli Sheliang Wang 13 Liu Shenkui 2 Guanhui Yu1 Pengtao Gong1 Degang Zhao3 Xuanjun Fang 13 Hainan Key Lab of Crop Molecular Breeding, Hainan Institute of Tropical Agricultural Resources, Sanya, 572025, China Alkali Soil Natural Environmental Science Center (ASNESC), Northeast Forestry University, Harbin, 150040,China Guizhou Key Lab of Agro-Bioengineering, Guizhou University, Guiyang, 550025, China Corresponding author Author’s email Abstract A rice gene, OsEH1, was amplified by PCR from the cDNA library of japonica rice Nipponbare, The gene was ligated to into expression vector pQE30 to construct expression vector pQE30-OsEH1, which was transformed to competent cell of Escherichia coli M15. The recombinant epoxide hydrolase labeled with six His was expressed in the host of Escherichia coli M15. In this study, a large quantity of 6xHis fusion protein 6xHis-OsEH1 were expressed by optimizing the IPTG induction concentration and cultural temperature, and we harvested about 7.46 mg of pure 6xHis-OsEH1