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CESI 8000 -Thermo Q-Exactive系统对生物制品第三水平的快速表征 在生物制药行业，由于单克隆抗体药物（mAbs ）的杂质和异 质性可以影响安全性或疗效，对其进行全面和可重复性的表征至 关重要。单克隆抗体是一类高分子量的糖蛋白（约150 kDa ），同 时包含一些其他的翻译后修饰（PTMs ）。单克隆抗体肽谱（第三 水平表征）可以提供关于纯度和异质性的定性和定量的信息。毛 细管电泳结合质谱具有优越的分离效率和对于单克隆抗体肽段和 糖肽的表征能力。运用电喷雾（ ）作为电离源，将 和 整合 ESI CE ESI 在一个动态的过中（CESI ），可对多肽和单抗进行高效的分析。 本文中，我们将展示使用 （ ） CESI 8000 AB Sciex Separation 结合Q-Exactive质谱（Thermo ）系统的对曲妥珠单抗的第三水平的 表征数据。该分析是将 与 整合在一个动态的过程中，与高分 CE ESI 辨质谱结合使用，结果显示该联用有如下优势。不同大小的肽段 （ 氨基酸）都可以被定性、分离和定量。特别是，我们可以对 3-65 仅仅 （ ）的样品进行降解热点的定性定量分析，如 100 fmol 15 ng 天冬酰胺脱酰胺化、蛋氨酸氧化、谷氨酸环化和 末端赖氨酸的异 C 质性。通过对糖肽的分离、定性和定量可以全面表征Asn300 的糖 基化热点。总体来说，这些结果表明使用 结合高分辨率的质谱 CESI 间相差小于 秒（ ），修饰和未修饰的肽段相 30 1.5% RSD 可以仅需很少的进样量并只使用单一蛋白酶——胰蛋白酶，通过对 对含量测定变化小于 。 2% 肽段及糖肽谱图分析，就具有对单抗快速全面表征的能力。 • 正交，CESI使用和LC-MS方法正交的分离机制分离、鉴 定、定量和验证序列变异以及得到翻译后修饰信息。 CESI对于质谱分析的优势 • 低流速，CESI使用的流速大约在20 nL/min ，能最大化离子 实验设计 化效率，且大大降低离子抑制效应，从而保证修饰肽段和 糖肽更好的离子化。 使用的是一根开管的毛细管，因 样品制备：从10 mg/mL 样品溶液中取出100 μg 样品，用 CESI 稀释变性，使用 还原和 烷基化，样品在 ℃经过 而无需其它的毛细管和泵连接流控装置。 Rapigest DTT IAM 37 胰蛋白酶酶解过夜，干燥，用前导电解质溶液（200 mM醋酸铵， • 高效的分离，毛细管电泳的固有高分离效率以及尖锐的峰 ）稀释三倍，得到最终浓度为 μ 的抗体酶解产物。 pH=4 300 ng/ L 型可保证高灵敏度和可重复性的定性定量分析。