基于氢键诱导的纳米金比色传感器实时检测脂肪酶活性 - 分析化学.pdfVIP

第43卷 分析化学 (FENXI HUAXUE)摇 研究报告 第4期 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2015年4月 ChineseJournal of Analytical Chemistry 484 ~489 DOI:10.11895/j.issn.0253鄄3820.140890 基于氢键诱导的纳米金比色传感器实时检测脂肪酶活性 1 1 1 2 *1 3 刘 佳 摇 张 卫摇 汤 燕摇 江 凌摇 田丹碧 摇 胡 燚 1 2 (南京工业大学理学院,南京211816)摇 摇 (南京工业大学食品与轻工学院,南京211816) 3(材料化学工程国家重点实验室,南京工业大学,南京211816) 摘摇 要摇 以巯基乙酸甲酯(MT)修饰的纳米金(AuNPs)为探针,构建了比色生物传感器检测脂肪酶活性。 在 pH6.5弱酸性条件下,脂肪酶水解MT鄄AuNPs上的酯键生成带负电荷的羧酸根;在pH3.0 的酸性条件下,探 针间会产生强烈的氢键作用使AuNPs聚集,基于此可以检测脂肪酶活性。 考察了温度、pH等因素对传感器 响应信号的影响。 MT鄄AuNPs 溶液在650 和520 nm 处的吸光度比值A /A 与脂肪酶活性大小在 3.0伊 650 520 -4 -2 -4 10 ~4.5 伊10 U/ mL范围内呈现良好的线性关系,检出限为2.25伊10 U/ mL(S/ N=3)。 测定了5 种商品 化脂肪酶的活性,实验结果与恒电位滴定法测定结果一致,证明本方法具有良好的实用性。 关键词摇 脂肪酶;酶活性;纳米金;氢键;比色传感 1摇 引摇 言 脂肪酶(3.1.1.3)被认为是继蛋白酶、糖化酶之后的又一重要工业用酶。 工业用脂肪酶大多来源 于微生物,筛选活力高、产量高及低成本的脂肪酶菌种是其关键技术环节,在脂肪酶的改造、分离、纯化 以及重组蛋白的筛选等领域,脂肪酶活力的测定都是不可缺少的关键技术,因此,建立高通量的酶活性 检测方法对于促进酶学研究和酶工程技术的发展都具有重要意义[1~4]。 [5] [6] [7] 目前,脂肪酶活性检测普遍采用酸碱滴定法 、浊度法 及光度法 ,但这些方法多存在灵敏度不 [7] 高、误差大、且费时费力、不适用于高通量检测等不足。 荧光法 虽然灵敏度较高,但大部分可被脂肪 酶水解的荧光底物均受限于反应介质的酸度,另外荧光猝灭等因素还可能影响实验结果的精确性。 对 于动辄数以千计的定向进化库而言,要进行高通量酶检测,这些方法存在较大局限性。 因此迫切需要建 立高灵敏度、高选择性,更加简单、快速、准确的脂肪酶检测方法。 纳米金因其独特的表面等离子体共振(SPR)效应成为构建生物传感器的优良材料,已被用于多种酶 [8~11] [12] 分析研究中 ,尤其是基于纳米金的比色检测方法由于其简单、快速已成为高通量检测方法之一 。 本实验以巯基乙酸甲酯修饰的纳米金(MT鄄AuNPs)为比色探针,构建检测脂肪酶活性的生物传感 器。