南极假丝酵母脂肪酶A 的表面展示及酶学性质.PDF

微生物学通报 JUL 20, 2011, 38(7): 1070−1076 Microbiology China © 2011 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 简 报 南极假丝酵母脂肪酶A 的表面展示及 酶学性质 * 严慧玲 蓝东明 王永华 杨博 (华南理工大学 轻工与食品学院 广东 广州 510640) 摘 要: 采用 a 凝集素作为载体蛋白, 首次将南极假丝酵母脂肪酶 A 展示在酿酒酵母细胞表面, 通过MD 平板筛选获得表面展示型的CALA 酵母工程菌株。免疫荧光检测显示CALA 被成功展示 在酵母细胞壁表面, 重组子经诱导后能在三丁酸甘油酯板上形成透明圈, 说明展示的 CALA 具有 活性。重组酵母在液体培养基培养72 h, 活性达到最高, 为80.4 U/g 干细胞。酿酒酵母展示的CALA 最适温度及pH 值为70 °C 和pH 8.0 。经50 °C 保温2 h, 仍含有60%水解酶活力。展示的CALA 在pH 7.0 和pH 8.0 溶液中比较稳定。经DMSO 处理2 h, 展示的 CALA 仍保持70%的活性。以上 结果表明酵母展示的CALA 可作为一种有潜质商业用途的全细胞催化剂。 关键词: 南极假丝酵母脂肪酶A, 酵母表面展示, 全细胞催化, 酶学性质 Cell surface display of Candida antarctica lipase A by Saccharomyces cerevisiae and its practical properties * YAN Hui-Ling LAN Dong-Ming WANG Yong-Hua YANG Bo (College of Light Industry and Food Science, South China University of Technology, Guangzhou, Guangdong 510640, China) Abstract: Lipase A gene of Candida Antarctica (cala) was displayed for the first time on the surface of Saccharomyces cerevisiae using a-agglutinin as an anchor protein, recombinant strains were screened on minimal dextrose plates. Results of immunofluorescence microscopy assay revealed that the CALA-a-agglutinin fusion proteins were successfully anchored on the S. cerevisiae cell surface. Fur- thermore, yeast displayed CALA produced