广州医科大学《临床免疫学检验》5.沉淀反应-2014.pptVIP

沉淀反应 Precipitation;沉淀反应： 是指可溶性抗原和抗体特异性结合，在适当条件下形成沉淀物的现象，其特性与经典的抗原抗体反应相同，包括液相沉淀试验和凝胶内沉淀试验。 （与凝集反应的异同？） ;沉淀反应的类型： 液相沉淀反应 凝胶中沉淀反应 免疫浊度分析 （本质为液相沉淀反应）;第一节 液相沉淀反应(fluid phase precipitation) ;液相内沉淀分为 絮状沉淀试验 环状沉淀试验 免疫浊度分析;一、絮状沉淀试验;表6-1 最适比方阵测定法;二、 环状沉淀试验;;第二节 凝胶内沉淀试验(gel phase precipitation) ;凝胶内沉淀试验分为： 自由扩散：单向琼脂扩散试验 双向琼脂扩散试验 ;一、自由扩散（一）单向琼脂扩散试验 single immunodiffsion;抗体+琼脂;;2、技术要点 制板：将抗体和热融化琼脂混合，倾注成平板。 打孔： 加样：待测抗原和抗原标准品， 反应：置37℃，24～48h后观察孔周围沉淀环。 ;3、 数据处理 ;（2）Fahey曲线 适用于小分子抗原，扩散时间较短(24h). 抗原浓度的对数（log c）与沉淀环直径（d）呈线性关系。 ;4、临床应用 用于IgG、IgA、IgM、C3、C4等定量测定。 简单、特异，但敏感性低，已被其它方法取代。;（二）双向琼脂扩散试验（double immunodiffusion）;（二）技术要点 琼脂倾注制板。 待琼脂凝固后，在琼脂胶板上打孔。 在相对的孔中分别加入抗原或抗体。 置室温或37℃18～24h观察沉淀线 。;应用;应用;应用;（三）方法评价 方法稳定、简便，不需特别仪器设备，重复性好，但灵敏度稍差(1.25mg/L)。;（四）临床应用;二、定向免疫扩散 ;分类 对流免疫电泳 (counter immunoelectrophoresis) 火箭免疫电泳 (rocket immunoelectrophoresis) ;(一)对流免疫电泳;1. 基本原理;;2.技术要点 ;3.方法评价;4. 临床应用;(二) 火箭免疫电泳;1. 基本原理 ;;2. 技术要点 ;3.方法评价;4. 临床应用;三、定向--自由扩散;（一） 免疫电泳（immunoelectrophoresis，IEP） ;1. 基本原理;;2. 技术要点;;3、方法评价;4. 临床应用;(二) 免疫固定电泳（immunofixation electrophoresis） ;2. 技术要点;　左图为IgG κ型, 中图为IgG λ型，右为正常 ;3、方法评价;4.临床应用;第三节 免疫浊度分析技术（immunoturbidimetry） ;免疫浊度测定按测量方式分为 透射免疫比浊法 （turbidimetric immunoassay或turbidimetry） 散射免疫比浊法 （nephelometric immunoassay或nephelometry）;;　入射光线 样品 被吸收、反射、折射 减弱 吸光度与IC量呈正相关，IC量与参与反应的抗原的量呈函数关系（抗体过量且固定浓度）。与已知浓度的抗原标准品比较，可确定标本中抗原含量。;;（三）方法评价 ;吸光度或散射光强度与待测抗原浓度呈正相关;（二）方法评价　;(一) 原理;原理：1、保证抗体过量； 2、避开不稳定阶段； 3、抗原过量的检测; 仪器测定技术要点 ;定时散射比浊法的抗原过量检测  ;原理： 抗原抗体结合反应的动力学测定法。 速率：单位时间内形成IC量（不是IC总量） 速率峰值的大小与抗原浓度呈正相关。;仪器测定技术要点 ;抗体过量第一峰值信号;(四)散射比浊法方法评价;　 1.抗体的质量 （高质量R型抗体） 　2.抗原抗体比例（抗体适当过量） 3.反应条件（PH值、离子强度） 　4.增浊剂的使用 （种类、浓??合适） 5.标本因素。 （伪浊度产生原因？） ;　免疫比浊分析临床应用;沉淀反应 液相沉淀反应 自由扩扩散：单扩、双扩 2. 凝胶沉淀反应 定向扩散：火箭与对流免疫电泳