广州医科大学《临床免疫学检验》11免疫金标记技术.pptVIP

DIGFA——双抗体夹心法测抗原 DIGFA——结果判断 临床应用与评价 检测细胞悬液或培养单层细胞的膜表面抗原 检测培养的单层细胞胞内抗原 检测组织中或切片中的抗原 免疫金电镜染色技术： 操作简便，敏感性高，定位精确，双标记或多标记 免疫金（银）光镜染色： 敏感性提高，可以替代荧光免疫技术；弥补其它标记染色技术本底过高和内部酶活性干扰的缺点 * * * * * * * * * * * * * * * * * 　　 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 金免疫层析试验（goldimmunochromatographic assay, GICA) G T C * 夹心法 竞争法(抑制法） 间接法 金免疫层析试验（ goldimmunochromatographic assay,GICA ) 双抗原夹心法 双抗体夹心法 * 双抗体夹心法 G区：金标特异性抗体(兔型) C区：羊抗兔Ig T区：特异性抗体 吸水纸 标本 阳性结果 * 竞争法 标本 G区：金标特异性抗体(兔型) C区：羊抗兔Ig T区：标准抗原 吸水纸 阳性结果 * 标本 G区：金标特异性抗体(兔型) C区：羊抗兔Ig T区：标准抗原 吸水纸 阴性结果 * 间接法－反流免疫层析法 ③ ⑤合上检测盒 窗(B) 吸水材料(A) 金标抗人IgG(G0) 吸水材料(D) 吸水材料(F) 标本加样区(E) 包被抗原（T） ① ② 标记线(G) ④ ⑥ ⑥液体流动方向 包被抗抗体（C） * 标本 C T C T 闭合前 闭合后 E 阳性结果 * C T * DIGFA与GICA的比较 DIGFA （穿透滤过型） GICA （横向流动型） 硝酸纤维素膜的种类 圆片膜 窄长型膜 试剂形式 渗滤装置及2瓶液体试剂（液相形式 ） 单一试剂条(板)（固相形式 ） 操作步骤 3 1 观察时间 操作结束(约3min)即刻观察 操作结束后 等待3-20min * IFA 穿流（FLOW THROUGH） ICA 横流（LATERAL FLOW） * 免疫金标记技术的优点 结果判读简单：以胶体金为指示剂，本身形成免疫分析过程后的颜色标记 自带质控对照 简便、快速：全部检测过程仅需 3-20分钟。 可单份检测 * 免疫金标记技术的不足之处 敏感度略低，价格略高（与ELISA比） 一般作为定性，不易定量。 金标法在临床中的应用 感染性疾病的诊断 妊娠、排卵的诊断 肿瘤标志 心肌标志 滥用药物 实例1：HBsAg的检测 实例2：HCG的检测 * 金免疫组织化学技术 一、免疫金（银）光镜染色技术 二、免疫金电镜染色技术 * ????????????????????????????????????????????????????????????????????????? 　　 免疫金银染色原理示意图 　　 * * HBsAg诊断试剂 试剂盒参考图示 * 操作 步骤1：洗净双手 步骤2：用采血针采指尖血 步骤3：将1滴指尖 血滴入加样孔 ，或 者用吸管将1滴指尖 血滴入加样孔 * 步骤4：立即加1-2滴缓冲液 步骤5：15分钟读取结果 * ??结果 ??结果 * 早孕胶体金法检测试剂 步骤１:从包装铝箔袋 中取出试纸条 步骤２:将试纸条按箭头 方向插入尿液标本中 步骤３:至少5秒后取出 放于干净平台上或放在 尿杯中读结果。测试结 果应在3分钟读取. * 小结 金免疫测定技术 金免疫组织化学染色技术 金免疫技术 斑点金免疫渗滤试验 金免疫层析试验 金免疫光镜染色技术 金免疫电镜染色技术 * 思考题： 什么是胶体金？ 它有哪些特性？ 检测小分子抗原时，通常应采用哪种金免疫层析技术进行检测？试述其原理？ 金免疫层析试验中，检测抗体时采用间接反流法有什么作用？试述其检测原理 试述金免疫层析技术检测HCG的原理 简述斑点金免疫渗滤试验检测HBsAg的原理。 * * * * * * * * * 免疫金标记技术(Immunogold labelling techique) 广州医科大学附属第一医院 王 慧 * 目的和要求 掌握金免疫测定在临床快速检验中的应用－斑点免疫金渗滤试验和金免疫层析试验的原理及方法学评价 熟悉胶体金与免疫金的特性、制备过程和影响因素 了解金免疫组织化学技术 * 免疫技术 试剂 标本 Ag Ab Ab Ag *