薄层层析中展开剂的选择new.pptVIP

薄层色谱中展开剂的选择;薄层色谱( Thin-layer Chromatography，TLC)法;TLC 操作方法;2 .点样应注意的问题 （1）点样量：一般为0． 5 ～ 10 μl，样品的浓度通常为0． 5 ～ 2 mg，太浓时展开剂从原点外围绕行，使斑点脱尾或重叠。点样量太小，不能检出清晰的斑点影响判断。点样量太多，展开剂不能全部负载，容易产生脱尾现象。 （2）样品的溶剂：原则上应选择对被测成分可以溶解但溶解度不是很大的溶剂。 （3）点样手法: 接触式点样直径通常控制在3 mm 以内，采用边点样边用吹风机吹干溶剂的方式。多次点样圆心要重合。;3. 展开 （1）展开剂的选择条件 合适的纯度。至少要用AR 试剂，展开剂如有杂质，则会直接影响分离效果。 适当的稳定性。一般不用三氯甲烷，因其中的乙醇量不够则易生成光气。 低黏度。能使其迅速展开。 沸点和挥发性集中。展开后能快速地在薄层上挥发样品，不影响显色和定量。 要尽可能的低毒性。 不与待测组分和吸附剂发生化学反应。 ;（2）根据样品的极性来选择展开剂 采用“相似相溶”原则来选择展开剂，极性强的组分需用极性强的展开剂，极性弱组分需用极性弱的展开剂。 若所选展开剂混合物的点都移到溶剂的前沿，则说明溶剂的极性过强，如果所选的展开剂几乎不能使混合物中的组分移动，则说明溶剂极性过弱。 改变多元展开剂的组成和比例，使待测组分的Rf 值在0.2～0.8 之间，定量测定应在0.3～0.5 之间，能使各组分之间有效地分离 ;（3）展开剂的配制应严格控制其比例准确度，如遇到比例很小的溶剂时，应尽量满足其精确度要求。展开剂配好后如果浑浊不清，待其静置分层取其上层( 或下层) 液进行展开。 （4）展开剂中加入少量酸或碱等拖尾抑制剂，一般的酸有乙酸、乙二酸、磷酸、甲酸等，碱包括三乙胺、二乙胺、吡啶、氨试液等，这类溶剂可抑制某些酸碱性物质或其盐类解离而产生斑点拖尾。;（5）加入丙酮等中等极性溶剂可使不相混溶的溶剂混溶，降低展开剂的黏度，加速展开。 （6）a. 底剂为展开剂比例较大的溶剂其极性应相对较弱，具有溶解物质和基本分离作用。 b. 展开剂中比例较小的溶剂极性应大??对被分离的组分有较强的洗脱能力，帮助化合物在薄层上移动，可增大Rf 值，可称之为极性调节剂。 ;调节剂的选择 a. 加入的调节剂与被分离物质应有相同或相似的官能团； b. 被分离物质具有两种或者两种以上的官能团时，加入一种调节剂，调节剂的官能团与被分离物质中一种官能团相同或相似，当加入第二种调节剂时，调节剂官能团与被分离组分的各种官能团相同或相似均可； c. 被分离物质具有多种官能团，如天然药物，一般情况下选择极性最强的官能团，即加入调节剂的官能团与物质极性最强的官能团相同或相似； d. 被分离物质具有强极性的官能团时，任选一种官能团即可。;4. 显色 展开后的薄层，可直接检视或显色后检视。显色方式有喷雾显色、浸渍显色和蒸气显色。 由于都存在些缺点，而且操作也不简便。 实验室多采用紫外仪检测。