用于蛋白酪氨酸激酶抑制剂高通量筛选的均相时间分辨荧光免疫方法 .pdf

1612 %%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%% 南方医科大学学报(J%South%Med%Univ)%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%2009;29(8) · · 用于蛋白酪氨酸激酶抑制剂高通量筛选的均相时间分辨荧光免疫方法的 建立 李旭桂 王广发 张俊艳 吴少瑜 徐 伟 吴曙光 张嘉杰 南方医科大学药学院 广 广州 510515 ， ， ， ， ， ， （ ， ） 摘要 目的建立一种均相时间分辨荧光免疫分析方法用于蛋白酪氨酸激酶抑制剂的体外高通量筛选 方法 根据铕联 ： 。 穴状化合物 EuK 和异藻蓝蛋白 XL-665 两个荧光化合物在激发后的能量共振转移所发出的特异性荧光 采用多功能 （ ） （ ） ， 酶标仪在波长为 和 处测定荧光信号的变化 以血管内皮生长因子 为蛋白酪氨酸激酶 检 612%nm% 670%nm% ; 2 （VEGFR-2 ） ， 测蛋白酪氨酸激酶抑制剂 Sunitinib 的抑制活性 结果 建立了一种用于蛋白酪氨酸激酶抑制剂体外高通量筛选的均相 。 时间分辨荧光免疫分析方法 在反应体系中 蛋白酪氨酸激酶VEGFR-2 三磷酸腺苷 ATP 和多肽底物浓度分别为 5% 。 ， 、 （ ） ng/ l 100% mol/L 和 1% mol/L 在上述条件下 检测到 Sunitinib 对 VEGFR-2 酪氨酸激酶抑制活性的IC 为 86.7% 滋 、 滋 滋 。 ， 50 nmol/L 与文献报道的结果近似 结论本实验所建立的均相时间分辨荧光免疫分析方法操作简便 重复性好 可用于 ， 。 ， ， 蛋白酪氨酸激酶抑制剂的体外高通量筛选。 关键词 蛋白酪氨酸激酶 时间分辨荧光免疫分析 血管内皮生长因子受体2 ： ； ； 中图分类号 R965.1 文献标识码 A 文章编号 1673-4254(2009)08-1612-03 ： ： ： - Establi