高效液相色谱法分析生物样品中的敌鼠.pdfVIP

高效液相色谱法分析生物样品中的敌鼠 杨士云，潘冠民，孟广范，张大明 北（京市公安局法医中心，北京 100085） 摘要：研究用阴离子交换、氰基及硅胶柱固相萃取技术分离提取血、尿、肝及肾中的敌鼠。以香豆素作内标，用高效 液相色谱-二极管阵列检测器方法进行分离鉴定。色谱条件：分析柱为HypexsilBDSC18(5 m,150mm×4.6 mm i.d.)，保护柱为PhenomenexODS(4mm×3.0mmi.d.)；流动相：A为0.5％离子对A水溶液，B为0.5％离子 对A甲醇溶液，以梯度淋洗程序分离；检测波长为286nm。当敌鼠的质量浓度在1mg/L～?100mg/L范围时，其浓 度同其峰面积与内标物的峰面积之比有良好的线性关系(r=0.9999)，最小检出限量为5ng按（S/N=3计）。 关键词：高效液相色谱法／二极管阵列检测器；敌鼠；固相萃取 中图分类号：Ｏ658 文献标识码:A 文章编号：1000-8713(2001)03-0245-03 1 前言 缓冲液稀释至6mL，离心，过已活化好的SAX柱2 次，流速1mL/min，之后用5mL缓冲液冲洗柱，姚 在抗凝血鼠药中，敌鼠由于其极性较大，提取检 吹干。用6mL2％的盐酸甲醇溶液洗脱，洗脱液浓 测比较困难，且不易气化，热稳定性差，用GC/MS 缩至1.0mL，供测定。 难以分析。已报道的检测方法多用有机溶剂提 (2)取血1mL，加入香豆素10g,混匀。加入 取[1,2]，TLC法、HPLC法[1,3,4]等分析。也有的采 2mL乙腈，旋涡振荡3min～5min，离心。残渣用4 用有机溶剂提取后，再用固相提取柱净化的方 mL乙腈分2次洗涤。合并每次离心的上清液，过 法[3,4]。Braselton等[5]采用直接进样法，电子撞击 SILICAGEL柱，流速1mL/min，吹出柱内溶液，浓 电离-质谱 ／质谱检测方法。本文用阴离子交换 缩至1.0mL，供测定。 (SAX)，氰基(CN)，硅胶(SILICAGEL)固相提取柱 2.4 尿样的处理 萃取，HPLC方法分析，对生物样品中的敌鼠进行了 (1)取尿 1mL～?2mL，其余操作同“2.3”苯中 分离测定，取得了较好的效果。本检验方法简单、准 的 1（）项。 确、快速，适合于敌鼠的快速定性定量分析。 (2)取尿 1mL～?2mL，用1％的离子对A水溶 2 实验方法 液稀释至6mL，离心，过已活化好的CN柱2次，流 速 1mL/min。用 1％的离子对A水溶液5mL洗 2.1 材料与试剂 柱，N吹干。用1％离子对A甲醇溶液6mL进行 色谱纯甲醇、乙腈；去离子水；20％的离子对试 洗脱。洗脱液中加人香豆素10g，然后浓缩至1.0 剂A天（津化学试剂二厂）；固相提取柱有SAX柱 mL，供测定。 (Rubbermaid公司)、CN柱 A（lltech公司）和SILICA 2.5 肝、肾样品的处理 GEL柱 天（津开发区富集色谱技术发展公司）;1 取铰碎的肝或肾1g，加入香豆素10g，其余操 g/L,100mgL 的敌鼠标准品的甲醇溶液；1gL，10 作同血样品处理的 “2.3节中的2（)项。 mg/L的香豆素标准品的甲醇溶液；0.025mol/L磷 2．6 回收率的测定 酸盐缓冲液p（H3，以下简称缓冲液）;1％离子对A 2.6.1 血中敌鼠回收率的测定 取血样7份，每份 水溶液。