“DNA的粗提与鉴定”实验材料的选择及方法的探究.pdfVIP

生物学教学2008年(第33卷)第11期 ·79· “DNA的粗提与鉴定’’实验材料的选择及方法的探究 李青芝 (河南省周口师范学院生命科学系466000) “DNA的粗提与鉴定”是高中阶段生物学课程中 下层较浑浊，上层澄清，很快 (但鲜月季叶、鲜小叶黄杨 的一个必做实验。从理论上讲，只要具有细胞核的生 叶除外)上层溶液中，就会有粘稠丝状物或絮状物 (与 物组织均可选择作为实验材料。但在实验中应尽量考 植物的材料有关)析出现象(见表 1)，且慢慢上浮多聚 虑材料易得、节钱省时、操作简便、成功率高等优点。 集于液面上，此即为DNA的粗提物。 本文报告了笔者选用多种植物材料，从实验现象、效果 大多数资料介绍用冷冻的酒精，经试验比较，用室 等方面加以比较，筛选 出更为理想的实验材料和简便 温酒精析出DNA的量无明显差异，建议冷冻步骤可省 的实验方法。 略。 1 材料与方法 (4)DNA鉴定 根据 DNA与二苯胺试剂作用(沸 1．1 材料 鲜西兰花、鲜菜花、洋葱、鲜蒜黄叶、鲜韭 水浴)显色变蓝的性质，可用二苯胺显色反应现象鉴定 菜叶、鲜菠菜叶、鲜芹菜叶、鲜包菜叶、鲜 白菜叶、鲜月 DNA。 季叶、鲜小叶黄杨叶。 供试的每种植物材料各取两支干净试管贴上标 1．2 仪器试剂 研钵、漏斗、纱布、试管、烧杯、量筒、玻 签，并编 l、2号，各加入 2mol／L的NaC1溶液 1mL备 璃棒 、自制长约 15era粗糙的细竹签、架盘天平 (感量0． 用。设 1号试管为准备加入上浮析出物的试管，2号 1g)、2mol／LNaC1溶液、95％酒精溶液、二苯胺试剂。 试管为空白对照。用粗糙的细竹签沿着一个方向，将 I．3 配制二苯胺试剂 将 15mL浓 H2S04(比重 1． 上浮析出物轻轻卷起 (絮状物不好取出，应贴着试管壁 84)沿干净的小烧杯内壁缓慢倒入 100mL冰乙酸中， 取)，加入到 1号试管中，振荡使其溶解 ，再向I、2号试 待溶液降至室温后，称取 2g二苯胺加入其 中，搅拌至 管中分别加入 lmL二苯胺试剂，置沸水浴加热，观察 二苯胺完全溶解，倒入干净的棕色试剂瓶保存 (最好现 溶液显色现象。 配现用)。若容器不洁净或药品用量掌握不好，会使试 2 实验结果 剂呈淡绿色或淡蓝色，导致显色时间过长或不显色。 据表 1结果：11种供试材料 ，从析出的粘稠丝状物 正确的试剂颜色应为无色，配制二苯胺试剂非常关键。 或絮状物量的现象看，鲜西兰花、鲜菜花析出的量最 以上所用试剂均为市售A．R级。 多，现象十分明显；洋葱、鲜蒜黄叶、鲜韭菜叶次之；鲜 1．4 方法 具体方法如下 ： 菠菜叶、鲜芹菜叶再次之；鲜包菜叶、鲜白菜叶析出的 (1)研磨 各称取5g鲜西兰花、鲜菜花、洋葱、鲜 量少。这 9种材料析 出和上浮现象出现较快 (1～ 蒜黄叶、鲜韭菜叶、鲜菠菜叶、鲜芹菜叶、鲜包菜叶、鲜 5min)；而鲜月季叶、鲜小叶黄杨叶析出现象出现最慢 白菜叶、鲜月季叶、鲜小叶黄杨叶。各放入干净的研钵 (约 1h)量最少。结果鉴定：沸水浴5～10min后，鲜西 中研磨成糊状物 ，然后各加入 10mL、2mol／LNaCI溶液 兰花、鲜菜花、洋葱、鲜蒜黄叶、鲜韭菜叶、鲜包菜叶、鲜 与各研磨糊状物调均。 白菜叶各 I号试管观察到显色现象，2号试管无变化， 有些资料建议在研磨中加入洗洁精或洗衣粉，其 表明这7种蔬菜各 1号试管中加入的上浮析出物，就 作用不仅能破坏细胞膜系统，有