HBx基因转染对Huh7细胞中基因转录的影响.pdfVIP

· 282· 肿瘤2008年4月第28卷第4期 Tumor Vo1．28，No．4，April，2008 DOI：10．3781／j．issn．1000—7431．2008．04．003 HBx基因转染对Huh7细胞中基因转录的影响 章 莉 ，郑大利 ，黄 健 ，韩泽广 (1．华东理工大学生物工程学院生物化学系，上海 200237；2．上海市疾病与健康基因组学实验室-省部共建国家重点实验室 培育基地，国家人类基因组南方研究中心，上海 201203；3．上海交通大学医学院附属瑞金医院血液学研究所，上海 200025) [摘要] 目的：研究且 基因对肝癌细胞Huh7中基因表达的影响，为探讨HBx在肝癌发生发展中的分子机制提供依据。 方法：以pcDNA3．1b质粒为载体，将船 转入Huh7细胞中，同时将pcDNA3．1b作空白对照。用Western印迹法证实基因转 染成功。应用Aflymetrix公司的人类全基因组寡核苷酸基因芯片分析转染HBx基因前后，Huh7细胞的基因表达谱。随机选 择转染前后有明显差异的6个基因(3个上调，3个下调)，用荧光定量PCR技术进行验证。结果：从基因芯片结果分析中发 现，与对照组相比,HBx转染后Huh7细胞中明显上调的基因有88个，下调的基因有l11个，这些差异基因的功能涉及多个方 面。结论：船 基因对肝癌细胞的影响是双向的，既有转录激活的作用，同时又有转录抑制的功能。这些数据对于理解船 基因在肝癌发生发展中的作用具有重要的参考意义。 [关键词] 癌，肝细胞；转录激活因子类；寡核苷酸序列分析；基因，HBx [中图分类号] R730．3 [文献标志码] A [文章编号] 1000-7431(2008)04-0282-06 The effect of HBx protein on gene transcription in Huh7 cells ZHANG Li ‘ ，ZHENG Da—li ’ ，HUANG Jian ，HAN Ze—guang ’ 、 (1．Department of Biochemistry Institute，College of Bio— engineering，East China University of Science and Technology，Shanghai 200237，China；2．Shanghai—Ministry Key Laboratory of Disease and Heahh Genomics，Chinese National Human Genome South Study Center，Shanghai 201203，China；3．Hematology Institute of Ruijin Hospital，College of Medicine，Shanghai Jiaotong University，Shanghai 200025，China) [ABSTRACT] Objective：To study the effect of HBx on the gene expression profile in the hepatocellular carcinoma cell line Huh7 and to provide the molecular evidence for exploring the role of HBx in the tumorigenesis of hepatoma．Methods：HBx gene was trans— fected into Huh7 cells carried by pcDNA3．1 b plasmid which contained the entire open reading frame(ORF)0f且 gene．The empty vector of pcDNA3．1 b was used as a contro1．The HBx expression in transfected cells was confirmed by Western blotting as compared with those transfected with empty vectors．And then a microarray analysis was performed to detect the gene expression profile in Huh-7 cells by Human Genome U133 Plus 2