用不依赖培养的方法研究西湖水域微生物的多样性.pdfVIP

摘要 微生物作为物质循环和能量流动的主要参与者，在湖泊的生态系统中起着特 别重要的作用。传统上采用适当的培养基分离培养样品中的微生物，通过菌种鉴 定来研究微生物群落的结构。这种依赖培养的方法存在很大的局限性，且可培养 的微生物只占微生物的1％左右。随着分子生物学及其方法的发展，为了对西湖 生态系统更全面地了解，本实验室用不依赖培养的分子生物学技术对西湖水域的 微生物进行研究。 我们在西湖水域5个不同的位点和深度采集水样，通过提取水样中的总 DNA，以PCR的方法分离纯化微生物的总16SrDNA，连接转化入DH5a大肠杆菌 rDNA的部分序列进行 构建16SrDNA基因文库，挑选文库中的阳性克隆对其16S 测序，并用BLAST程序对基因库进行同源序列有哪些信誉好的足球投注网站，以DNAMAN软件构建了相 关类群的系统发育树。 西湖微生物16SrDNA文库的分析表明，文库具有很高的多样性。在进行了 分子鉴定和系统分类后，结果表明在27个克隆中有9个克隆与低G+C含量的革 兰氏阳性细菌相似，它们分别是Bacillussubtilis、Staphylococcussaprophyticus， brevis、Bacillus Stteptococcusporcinus，Brevibacillus cohnff，Bacillus 6 thuringiensis，Staphylococcusepidermidis和Bacillussimplex 个克隆与_r．变形菌亚纲的细菌相似，它们分别是Pseudomonas alcaligenes， Escherichia t．,pini4萄IAgrobacterium paucimobilis，Ochrobactrumrhizogenes；2个克隆与放线 casei和Micrococcusluteus： 菌亚纲的细菌序列十分相似，分别是Brevibacterium nodulosa和两个为未培养 3个克隆与蓝藻门的细菌十分接近，包括Leptolyngbya 的蓝细菌：另外，在27个克隆中还有3个克隆是属于真核生物，它们与分别与 真核生物的藻类Dinophysisnorvegica，Ditylum rDNA的序列。 拥有相似的序列。此外还有一个克隆可能为未培养微生物16S 关键词：西湖，依赖培养法，不依赖培养法，16SrDNA，TA克隆 3 of inXiziLake Communitydiversitymicroorganisms Determined methods byculture-independent Abstract As innutrientcirculation and majorparticipant energy rolein andenvironraentoflake．In play姐hnportantecology tr