利用单株抗体开发环丙氟酸酵素连结免疫吸附法检验试剂-中国畜牧学会.pdf

中國畜牧學會會誌 44(4) ：304~319, 2015 304 利用單株抗體開發環丙氟 酸酵素連結免疫 吸附法檢驗試劑 (1) (1) (3) (1) (1) 王渭賢 陳柏叡 林育興 張鎮璿 謝育錚 (4) (1) (2) (3) (5) 涂青宇 許添桓 洪紹文 摘要：本研究目的在於開發直接競爭型酵素連結免疫吸附法，期能精確、簡單 及快速檢測禽畜水產品中環丙氟 酸（ciprofloxacin, Cipro ）殘留之檢測試劑。 結果顯示利用 N-hydroxysuccinimide ester 螯合法可成功地製備 Cipro-human serum albumin （HSA ）之螯合物。以相同的方法亦可成功地製備山葵過氧化酶 （horseradish peroxidase ）結合體，並利用高效液相層析法（high performance liquid chromatography ）搭配紫外光檢測器和螢光檢測器可成功地檢測Cipro- HSA 螯合物。運用所製備之 Cipro-HSA 螯合物以腹腔注射免疫 BALB/c 小鼠 6 次後，可成功地誘導產生血清中抗體力價高達 16,384 倍以上。以融合瘤技 術生產單株抗體，並以此抗體製備直接競爭型 ELISA 檢測盤後，測得在磷酸 緩衝液中的最低檢測極限為 0.82 ppb ，在牛奶、胎牛血清、魚肉及豬肉中的 檢測敏感度分別為 0.93 、1.03 、0.87 和 0.85 ppb ，其檢測敏感度皆可低於 1.03 ppb 。Cipro-ELISA 檢測盤之組內 （intra-assay ）與組間（inter-assay ）檢測變 異值分別為 9.58% 和 8.21% 。此外，交叉反應實驗的結果顯示，除了Cipro- ELISA 檢測盤對 enrofloxacin 和 norfloxacin 有較高的交叉反應率外，其餘皆小 於 0.01% 。因此，綜合上述所有結果得知，本研究所開發之Cipro-ELISA 檢測 試劑具有簡單、快速及精確之特性，可應用於現場針對禽畜水產品 Cipro 類抗 菌劑之殘留檢驗。 （關鍵語：環丙氟 酸、酵素連結免疫吸附法、氟 諾酮類、單株抗體、殘留） (1) 國立中興大學獸醫學院獸醫學系，40227 臺中市南區國光路 250 號。 (2) 財團法人農業科技研究院動物科技研究所動物資源組，30093 新竹市香山區大湖路 51 巷 1 號。 (3) 元培醫事科技大學護理學系，30015 新竹市香山區元培街 306 號。 (4) 行政院農業委員會農業藥物毒物試驗所，41358 臺中市霧峰區舊正里光明路 11 號。 (5) 通訊作者，E-mail: lymphoma2002@.tw 305 緒　　言 於 1962 年 quinolone 類之化合物 nalidixic acid 首次被合成出來，並成功應用於人類泌尿 道感染症（Lesher et al., 1962 ）。由於廣泛地使用quinolone 類抗生素，因而造成抗藥性細菌 日益增加，使得同類型的藥物之抗菌效果日益下滑（Lesher et al., 1962 ）。第二代的quinolone 類抗生素 norfloxacin （Nor ）於 1980 年研發成功，因其抗菌活性遠優於第一代 quinolone 類抗 菌劑，至今已被廣泛應用於人類和家畜禽之細菌性感染症治療上（Eliopoulos, 1995 ）。新一代 的 quinolone 類藥物如 enrofloxacin （Enro ）、cipr