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* 动物细胞工程 高频考点突破 考点一 动物细胞培养技术 1.动物细胞培养的操作流程 2.考点解读 (1)培养条件 ①无菌、无毒的环境——无菌处理、加抗生素杀 菌、定期更换培养液。 ②营养——葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机 盐和微量元素+血清或血浆等天然成分。 ③温度和pH——(36.5±0.5)℃和(7.2～7.4)。 ④气体环境——95%空气+5%CO2。 提醒 ①CO2作用——调节培养基pH; ②空气中O2作用——细胞有氧呼吸; ③所用装置——CO2培养箱。 (2)原理：细胞增殖。 (3)动物细胞培养时,一般选取幼龄动物的组织、 器官,其细胞的分化程序较低,增殖能力强,有丝分 裂旺盛,容易培养。 (4)在动物细胞培养过程中,一般情况下10代以前 的细胞核型不变,10代以后有些细胞核型发生改 变,50代以后的细胞可能发生癌变。 (5)胰蛋白酶在动物细胞培养过程中的作用包括将 组织分散成单个细胞,以及将贴壁细胞从瓶壁上分 离下来,这样做的目的是避免动物细胞的接触抑制 现象。 3.应用 (1)生产细胞产品：干扰素、疫苗、单克隆抗体。 (2)检测并判断某毒性物质毒性的大小。 (3)临床医学研究。 拓展提升 动物细胞培养与植物组织培养的比较 快速繁殖、培育无病毒植株等 固体培养基,激素及其他营养物质 细胞的全能性 获得细胞或细胞产物等 目的 液体培养基,动物血清及其他营养物质 培养基 细胞的增殖 原理 不 同 点 都需无菌条件;都进行有丝分裂 相同点 植物组织培养 动物细胞培养 项目 考点二 动物细胞融合与单克隆抗体 1.单克隆抗体的操作流程 2.考点解读 (1)诱导融合的2种细胞名称及作用 免疫过的B淋巴细胞(浆细胞)——产生抗体; 骨髓瘤细胞——无限增殖。 (2)诱导融合与原生质融合的不同方法 动物细胞诱导融合的特有方法——灭活病毒诱导。 (3)2次筛选的目的及方法 ①在特定的选择性培养基上,未融合的亲本细胞 (浆细胞和骨髓瘤细胞)和融合的具有同种核的细 胞(BB融合细胞、瘤瘤融合细胞)都会死亡,只有融 合的杂种细胞(杂交瘤细胞)才能生长。这种杂种 细胞的特点是既能迅速大量繁殖,又能产生单一的 特异性抗体。 ②经选择性培养的杂交瘤细胞并非都是能分泌所 需抗体的细胞(很多种杂交瘤细胞),需经克隆化培 养和抗体检测,经多次筛选后就可获得足够数量的 能分泌所需抗体的细胞。 (4)2个培养提取场所 ①体外培养——培养液提取。 ②体内小鼠腹腔中培养——小鼠腹水中提取。 提醒 取相应B细胞前必需先注射相应抗原,形象 地说先“打针”,否则失败。 (5)原理：细胞膜的流动性和细胞增殖。 拓展提升 植物体细胞杂交和单克隆抗体的制备的比较 (1)物、化法：与植物细胞 融合相同 (2)生物法：灭活的病毒 (1)物理法：离心、振动、电刺激等 (2)化学法：聚乙二醇(PEG) 促融方法 注射特定抗原,免疫处理正 常小鼠 酶解法去除细胞壁(纤维素 酶、果胶酶) 融合前 处理 细胞膜的流动性、细胞增殖 细胞膜的流动性、细胞的 全能性 理论基础 (原理) 动物细胞融合(单克隆抗体 的制备) 植物体细胞杂交 单克隆抗体 的提纯 杂种植株的 诱导与鉴定 第四步 杂交瘤细胞 的筛选与培 养 杂种细胞的 筛选和培养 第三步 动物细胞的 融合(物、 化、生法) 原生质体的融合 (物、化法) 第二步 正常小鼠 免疫处理 原生质体的制备 (酶解法) 第一步 过程 (1)制备单克隆抗体 (2)诊断、治疗、预防 疾病。例如:单抗诊断 盒、“生物导弹”治 疗癌症 (1)克服远缘杂交不亲和的障碍, 大大扩展杂交的亲本组合范围 (2)克服有性杂交的母系遗传现 象、获得细胞质基因的杂合子、 研究细胞质遗传 意 义 和 用 途 * * *