PDS-1000基因枪操作.DOC

PDS-1000 基因槍操作 製備金粉： 以1.5 ml eppendorf tube稱取25 mg 金粉 加入絕對酒精，高速震盪1-2 分鐘 10000 rpm 離心1分鐘 重複三次 倒掉上清液，加入1 ml 無菌水，震盪數秒 10000 rpm離心1分鐘 重複清洗兩次 加入1 ml無菌水，分裝成每管50 μl，儲存於-20℃備用 轟擊準備工作： 將macrocarriers、holder、stopping screen、rupture disk浸泡在95﹪酒精中15分鐘後，晾乾備用 製備轟擊用子彈： 取清洗過的金粉，加入5 μl DNA（1 μg/μl），震盪1分鐘 加入50 μl 2.5 M CaCl2，震盪1分鐘 加入20 μl 0.1 M spermidine，震盪1分鐘 10000 rpm 離心10秒，倒掉上清液 以500 μl 絕對酒精清洗一次 10000 rpm 離心10秒，倒掉上清液 加入60 ~ 70 μl 絕對酒精，混合均勻，6 ~ 10 μl 滴在macrocarrier 上（一次一滴，慢慢滴） 轟擊操作： 將鋼瓶上閥門打開，調整壓力錶前黑色旋紐至適當壓力（至少較所需壓力高200 psi） 將上述物件組合成上圖，調整sample 與macrocarrier 之間的距離，關上chamber 抽真空至所需真空度，轟擊 待chamber 恢復壓力，取出sample 及所有零件 重複步驟2 ~ 4，直到所有實驗材料轟擊完 使用完畢後，關上鋼瓶閥門，抽真空，轟擊至鋼瓶上壓力錶降至零，回復chamber 壓力後即可關閉電源。將壓力錶前黑色旋紐逆時針方向旋鬆。 1 Transgenic Plant Lab. ACADEMIA SINICA