蛋白质电泳技术简介.pptVIP

电泳技术(蛋白质) 电泳（Electrophresis）: 在电场作用下,带电颗粒向着与其电性相反的电极方向移动的现象。 移动速度 决定于生物大分子的形状﹑相对分子量﹑分子带电性质及数目，还与分离介质﹑溶液黏度及电场强度等因素有关。 　 1.聚丙烯酰胺凝胶电泳 以聚丙烯酰胺凝胶为支持物，是由丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺在催化剂的作用下，通过自由基引发聚合反应，形成不带电荷、且具有分子筛性质的网状结构凝胶。 通常聚丙稀酰胺凝胶电泳包括： 　 PAGE (高, 低pH) 　 SDS电泳: 还原型SDS（高浓度胶20%） 进行电泳分析 SDS主要应用 1）被纯化蛋白质的纯度分析 2）蛋白质（or亚基）分子量测定 3）免疫印迹(Western blotting)的 第一步 …… 　 　　 2.等电聚焦（ IEF ） 等电聚焦（Isoelectric Focusing ） 　　利用具有不同等电点（ pI ）的蛋白质在线性pH梯度下泳动（蛋白质所处的pHpI时，向着负极移动，反之则向正极移动），并聚焦于与其pI值相同的pH位置，达到蛋白质混合物分离的方法。 3.双向凝胶电泳(2-DGE) 双向凝胶电泳（two-dimensional gel electrophoresis ）： 先第一向--采用等电聚焦分离 后第二向--采用SDS分离 今天的模拟蛋白质纯化实验过程成功与否的重要检验方法： 2-DGE 目前最有效 , 分辨率最高的蛋白质电泳手段!!! * 水平电泳 琼脂糖电泳图 垂直板电泳 注意安全!!! 家蚕幼虫血淋巴中SOD纯化过程的电泳分析 4 3 2 1 聚丙烯酰胺凝胶电泳 4 3 2 1 M M 67k 43k 30k 染色: 用银染法或染料法进行染色 估测蛋白质或亚基的分子量 等电聚焦电泳 pH梯度 (-) (+) Isoelectric focusing : An important step in two-D gel eletrohporesis 目前最有效 , 分辨率最高的蛋白质电泳手段!!! 先第一向--采用等电聚焦分离 后第二向--采用SDS分离 pH 分子量Kd 双向凝胶电泳 1D 2D *