羧甲基纤维素对角膜上皮损伤修复的影响及其机制探讨.pdfVIP

目 录 中文摘要…………………………………………………………………．1 英文摘要…………………………………………………………………．4 研究论文羧甲基纤维素对角膜上皮损伤修复的影响及其机制探讨 前言…………………………………………………………………．9 刚吾…………………………………………………………………．y 材料与方法…………………………………………………………．9 结果…………………………………………………………………．12 附图、附表…………………………………………………………．15 讨论…………………………………………………………………．19 结论…………………………………………………………………．20 参考文献……………………………………………．’………………2l 综述 羧甲基纤维素在眼科中的应用…………………………………25 个人简历…………………………………………………………………．36 致谢………………………………………………………………………．37 中文摘要 羧甲基纤维素对角膜上皮损伤修复的影响及其机制探讨 摘 要 粘性多糖，是人工眼泪的主要组分，能延长药物在眼球表面的停留时间。 研究表明CMC可以明显改善干眼症患者的临床症状，并且其效果呈剂量 依赖性。通常认为CMC可以延长药物在眼球表面的停留时间是由其物理 特性决定的，目前尚不知CMC是否可以直接作用于眼球表面，特别是上 皮细胞，从而影响角膜上皮损伤的修复。有报道认为CMC可以减低LASIK 术后眼球上皮损伤的发生率，也有人报道配戴隐形眼镜前滴加CMC滴眼 液具有细胞保护作用，减轻角膜和结膜充血，并且使眼部感到更为舒适。 尽管CMC发挥这些保护作用的确切机制尚不清楚，但这些研究提示CMC 可能参与眼球表面上皮损伤的修复过程。 closure 本研究将采用体外划伤愈合分析(scratch．woundassay)和动物 模型观察CMC对角膜上皮损伤修复的影响，并探讨其可能的机制。 方法：1、细胞培养：将复苏传代的人角膜边缘上皮细胞(human comea-limbal 2、体外划伤愈合分析：将HCLE细胞接种于预先用胶原I包被的8孔 腔式培养玻片上，制备体外细胞划伤愈合分析模型。利用图像分析软件系 统在不同位置测量划伤的平均宽度，计算划伤愈合的百分率并进行组间比 较。 3、细胞增殖实验：将HCLE细胞按每孔1×104个细胞接种于黑色 96孔培养板上，孵育24小时后，加入含有不同浓度(O，O．02，O．2， 继续培养O、8、24和48小时。室温下放置2．5分钟，摇匀测定每孔的荧 光强度(波长485／535nm)，荧光强度的数值与每孔活细胞数成正比。 4、细胞迁移分析：将HCLE细胞接种于硅化处理的胶筒内，加入 u K．SFM培养基，置培养箱内培养至单层满汇合时，加入100M羟基脲 (hydrox”rea)继续培养24h，以阻止细胞增殖。去掉胶筒，用K．SFM 中文摘要 培养基洗涤细胞三次，再加入含有和不含有CMC的培养基继续培养24h。 培养结束后用Di雕Quik试剂对细胞进行固定并染色，显微镜下观察细胞 迁移情况并拍照。 ‘5、细胞趋化分析：将HCLE细胞接种于上层腔式培养板内，然后置 ‘于下层腔式培养板内，加入含有或不含有CMC的K—SFM培养基，同时 加入含有2m∥mL透明质酸钠(HA)的K-SFM培养基作为阳性对照， 置培养箱内培养12h。迁移至膜底的细胞用消化液溶脱掉，然后用裂解缓 冲液裂解细胞，加入荧光染料与细胞的核酸结合，用分光光度计测定荧光 强度(波长485／535姗)，荧光强度反映迁移的细胞数。 6、细胞粘附试验：将HCLE细胞悬液接种于预先用纤维连接蛋白(5 II Ii咖n也)、I型胶原蛋白(10