毛细管电泳法.pptxVIP

毛细管电泳法; 毛细管电泳是带电粒子在电场力的驱动下，在毛细管中按其淌度或分配系数不同进行高效、快速分离的电泳新技术，也称为高效毛细管电泳。 ;一、毛细管电泳的原理;进样方法;2、流体动力学进样 也称为虹吸进样、重力进样、压差进样 方法:毛细管进样端插入试样溶液容器，通过进样端加压，或检测端出口减压，或调节进样端试样溶液液面大于出口端缓冲液液面高度，利用虹吸现象，使进样口端与出口端形成正压差，并维持一定时间，试样在压差作用下进入毛细管进样端，再把进样端放回缓冲液液槽中，进行电泳。;电泳 是指在电场作用下，溶液中的带电粒子作定向移动的现象。; 电渗与固液界面的双电层有着密切的关系 ; 粒子在毛细管内电解质中的迁移速度等于电泳和电渗流(EOF)两种速度的矢量和,正离子的运动方向和电渗流一致,故最先流出；中性粒子的电泳流速度为“零”，故其迁移速度相当于电渗流速度；负离子的运动方向和电渗流方向相反,但因电渗流速度一般都大于电泳流速度,故它将在中性粒子之后流出,从而因各种粒子迁移速度不同而实现分离。 ;电渗流的流型特点; 电渗是CE中推动流体前进的驱动力，它使整个流体像一个塞子一样以均匀的速度向前运动，使整个流型呈近似扁平型的“塞式流”。它使溶质区带在毛细管内原则上不会扩张。但在HPLC中，采用的压力驱动方式使柱中流体呈抛物线型，其中心处速度是平均速度的两倍，导致溶质区带本身扩张，引起柱效下降，使其分离效率不如CE。;电渗流的意义 电泳过程中，伴随着电渗现象 电渗流的速度比电泳速度快5－7倍 利用电渗流可将正、负离子或中性分子一起向同一方向，产生差速迁移，在一次电泳操作中同时完成正、负离子的分离分析 电渗流是毛细管电泳分离的重要参数 控制电渗流的大小和方向，可提高毛细管电泳分离的效率、重现性、分离度。 ;二、分离模式;1 毛细管区带电泳 CZE;川芎中川芎嗪和阿魏酸含量的毛细管电泳测定;Ligustrazin 川芎嗪;2 胶束电动毛细管色谱 MECC ;SDS胶束的结构示意 里面有一个疏水内核，外面布满了S03ˉ离子??;测定半夏等药材中苯甲酸的含量 SDS;3 毛细管凝胶电泳 CGE;毛细管凝胶电泳综合了电泳技术和平板凝胶电泳的优点 : 电泳峰尖锐，柱效极高 短柱上实现极好的分离 试样容量为10－12g 主要缺点:制备柱较困难，寿命较短 已成为分离分析生物大分子如蛋白质、多肽、核 酸、DNA等强有力的工具。例应用CGE分离与激光诱导荧光检测相结合，用于DNA序列快速分析。 ;4 毛细管等速电泳 CITP ;假定有区带 L， A， B， C， T， 则各区带的移动速度为： ? v T = v A = v B = v C = v L ?或： ? T E T = ? A E A = ?B E B = ? C E C = ? L E L ? 式中，?，有效淌度， E，电场强度;若某一区带的离子进入前一区带， 由于电场强度变小而减速，由若进入到下区带，由于电场强度变大而加速， 都退回到原区带, 结果导致各区带形成鲜明的界面.;5 毛细管等电聚焦 CIEF ;注意： 电渗流在CIEF中不利，电渗流的存在会破坏聚焦区带的稳定，应消除或减小。