沙田柚皮水溶性多糖的提取和测定.pdfVIP

2纠200z协t勰胁盯 良品科学 ※T艺技术 1．2 柚皮多糖的提取 取适量沙田柚皮细颗粒，置于圆底烧瓶中，加入 石油醚，40℃回流浸提2h，以脱去表面脂肪，抽滤并 挥干滤渣溶剂。然后分别取定量滤渣。以永作为溶剂， 《 采用不同的温度、料液比、提取时间对滤渣进行多糖 的提取实验。合并滤液，浓缩至原滤液体积的1，4，加 入体积相当于溶液体积3倍的95％乙醇，多糖星絮状沉 淀析出，静置24h后，离心分离(3000～6000“邢in)20面n ¨们¨嘶¨¨”¨¨o 4004204404604∞500520540560580 左右。用适量无水乙醇、丙酮洗涤沉淀多次，40℃烘 波长0Im) 箱内烘干，即得沙田柚皮粗多糖。 围1标准溶液显色后的吸收光谱 l|3 租多糖的提纯 soIutlon Fig．1 Ab∞rption3pect限of咖dard 提取后的粗多糖中含有蛋白质、色素等杂质，利 用术瓜蛋白酶法除蛋白、色素并对多糖组分进行分级， 以得到多糖精品。将木瓜蛋白酶按蛋白酶：多糖=1：20加 入多糖溶液中，于70℃在恒温磁力搅拌器中保温5h，加 入多糖溶液体积l，5体积的氯仿，再加入氯仿体积1，5的 墨 正丁醇，混合后，剧烈振荡20～30min，分去水层和 溶剂层交界处的变性蛋白质，重复3次。浓缩、醇沉、 洗涤、干燥得脱蛋白的多糖。 1．4 多糖的测定 准确移取O．6000mg，ml的葡萄糖标准溶液1．5、2．5、 葡萄糖浓度舢蛐) 3．5，4．5、5 5ml，分别转移到50ml容量瓶中定容，摇 图2 葡萄糖标准曲线 匀得系列对照品溶液。准确移取上述溶液2．0ml，置于 S组ndardcu^停of F嘧．2 gIucose 10ml具塞试管中，加入4．0％苯酚溶液1．0m1、浓硫酸 4．0m1摇匀，沸水浴保温15min后放入冷水中冷却。以 试剂空白为参比，选用5mm比色皿在最大吸收波长 490nm处测定其吸光度，得标准曲线。量取纯化后的定 量样品，加4．0ml无水乙醇，离心分离，取沉淀，加 蒸馏水溶解后转移至50ml容量瓶中定容。准确移取2．OInl 于10ml具塞试管中后按上述方法操作．并根据标准曲线 一琶辟苷鞘龉讯 计算总糖含量。 2 结果与分析 时间m) 2．1 最佳波长的选择 图3 提取时问对多糖提取率的影响 分别吸取一定量的葡萄糖标准溶液和样品溶液，按 3 e)ctmctiOntimB Fig POly8accll洲de8yie旧a竹∞t鲥by 照1．4方法操作，进行波长扫描实验。结果发现：波 长在490Ⅻ附近吸收最大，故选择490nm为吸光度测定 由图3可知，提取时间为3、4