水溶性阳离子荧光共轭聚合物作为荧光探针测定三磷酸腺苷.pdfVIP

研究简报 第5期 第38卷 分析化学(FENxIHuAxuE) 2010年5月 Chine眈Joumal“AnalyticalChemistry 7ll一714 Dm：10．”24／印．J．10％．加10．00711 水溶性阳离子荧光共轭聚合物作为荧光探针测定三磷酸腺苷 王运1 王伟1 何治柯砣 关洪亮2 1(华中农业大学理学院，武汉430cr70) 2(武汉大学化学与分子科学学院，生物医学分析化学教育部重点实验室，武汉430072) 摘要利用荧光光谱研究了三磷酸腺苷(ATP)与水溶性阳离子荧光共轭聚合物的相互作用，发现加入Ar即 后，聚合物的荧光强度被显著猝灭，且猝灭程度与A1P的加入量成正比，据此建立了测定A11P的方法。荧光 光谱的激发波长选择395砌，发射波长为52l砌，激发狭缝宽度为10．O咖，发射狭缝宽度为10．O啪。在 0．05 为2．O×10一moL／L；回收率在93．6％一105．6％之间；相对标准偏差在2．2％～6．9％之间。本方法用于三磷 酸腺苷二钠药片和鲫鱼肉中ATP的测定，获得满意结果。 关键词荧光共轭聚合物；荧光光谱；三磷酸腺苷二钠 1 引 言 三磷酸腺苷(A，IP)是生物体中重要的能量物质…，建立快速、简便监测ArIP的方法对于深入研究 J、生物发光法”J、高效液相色 其功能具有重要意义。目前，测定A，I’P含量的方法主要有电化学分析法【2 谱法H]、毛细管区带电泳法∞1及荧光光谱法∞1等。但电化学分析法、生物发光法、毛细管区带电泳法和 高效液相色谱法存在仪器昂贵、操作繁琐等缺点，而A11P检测试剂盒价格较高，试剂保存条件苛刻，不 利于反复使用。虽然检测ATP的方法在不断改进，但灵敏度和选择性仍然难以满足实际需要。荧光光 谱法具有操作简便、灵敏度高、选择性好等特点，作为荧光探针的有小分子【7J、聚合物哺1及量子点等-。 水溶性荧光共轭聚合物作为一类新型荧光探针具有摩尔吸光系数大、荧光量子产率高等优点，还具有 “分子导线”的功能，能够实现荧光信号的放大，常用于生物大分子和生物小分子的检测等¨¨”1。 本实验采用的水溶性阳离子荧光共轭聚合物(wCFP)属于一种聚噻吩衍生物。噻吩是五元环结 构，符合休克尔规则，具有适中的能隙、较宽的光谱响应、良好的环境稳定性和热稳定性，是一类性能优 异的仃．电子系共轭光、电材料¨4’15J。利用WCFP与A1曙相互作用的荧光光谱特性，建立了以WCFP为 荧光探针测定ATP的新方法，并将本方法应用于三磷酸腺苷二钠药片和鲫鱼肉中A1P的测定，结果令人 满意。本方法不仅简便、准确，试剂稳定、重现性好，而且具有反应时间短，试剂用量少，污染小等优点。 2实验部分 2．1仪器与试剂 Evolution Ls-55型荧光光谱仪(美国PerkinElmr公司)，Nicolet300型紫外一可见分光光度计(美国 热电公司)。本实验所采用的wcFP属于一种聚噻吩衍生物，结构见图l插图。单体的相对分子量为 均配制成2．00×10～moL／L的储备液，其中wcFP浓度以单位计；其它试剂均为分析纯，所用纯水来自 moL／L MQ·cm)。0．5Tris—HCl缓冲液。 Aquapro纯水系统(中国重庆颐洋有限公司，18 2．2实验方法 nm，发射波长为52lnm，激发和发射光谱宽度带为10．O啪。实验考察 荧光光谱的激发波长为395 了缓冲溶液、pH值、离子强度、干扰离子等对ATP猝灭聚合物荧光光谱的影响。 2009JD9一l 2．1 8收稿；2009—15接受 本文系国家自然科学基金(N∞．90r7171ll资助 ·E-mail：zlIkhe@whu．edu．cn 712