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唾液淀粉酶最适PH值测定摘要：酶是具有高效催化能力的生物大分子物质，底物浓度相同时，酶的催化活性主要受温度、pH等因素影响。温度一定时，酶活力最高时的pH值为该酶在该温度的最适pH。在不同pH值下。通过测定淀粉酶水解底物的程度，测定唾液淀粉酶的最适pH值。在不同pH条件下，淀粉被唾液淀粉酶水解，与碘液反应呈现颜色反应，通过对颜色的观察和分光光度计测量产物吸光值的大小。可知底物的反应程度，从而可以判断出唾液淀粉酶的最适pH。关键词：唾液淀粉酶 最适pH 吸光值前 言：酶是由生物体内活细胞产生的一种生物催化剂，细胞新陈代谢包括的所有化学反应几乎都是在酶的催化下进行的。酶催化化学反应的能力称为酶活性。酶的化学本质是蛋白质，它具有两性电解质的性质，在一定溶液中可以发生解离作用。酶无论在生活中还是在医学领域都具研究意义，酶的各种特性被广泛应用于各个领域。影响酶反应活力的因素很多，主要包括pH、温度、酶浓度、金属离子浓度、抑制剂等。酶在水溶液环境中的解离状态和行为，都受到H+的影响，酶活性中心功能基团解离状态将直接影响到酶的活化以及酶与底物的亲和力，其会随着溶液pH的改变而改变。所以，溶液pH对酶催化反应的速度有明显的影响。在某-pH值时，酶活性达到最大，这一数值称为酶的最适pH。不同的酶的最适pH不相同。淀粉经唾液中的淀粉酶水解，生成糊精和麦芽糖，在底物过量的条件下，反应后加入碘液与未被水解的淀粉结合生成蓝色复合物，其颜色的深浅与空白管颜色的差值和淀粉酶的活力成正比。用单位时间剩余淀粉量与碘反应产生的蓝色在660 nm处的吸光度值来表示淀粉酶的活性。在温度、酶浓度相同的情况下，酶活力在最适pH的情况下达到最大。一、实验步骤：1.不同pH缓冲液的配制配制各个pH的缓冲液10ml，选择pH值从5.8-7.6，间隔0.2。表1 磷酸缓冲液配制表用量 (mL)编号pH0.2mol/LNa2HPO4(ml)0.2mol/LNaH2PO4(ml)蒸馏水16.00.624.385.0026.20.934.075.0036.41.333.675.0046.61.883.125.0056.82.452.555.0067.03.051.955.0077.23.601.405.002.唾液的获取先漱口1-2次，然后含一大口水约1min，期间做咀嚼运动，然后收集至干净的烧杯中。3.淀粉用量的确定如表2，设置实验组与空白对照组。表2 实验组和空白对照组设置表用量 (mL)实验组12345空白对照7.0 pH缓冲液0.90.90.90.90.90.92.5淀粉0.10.20.30.40.5---唾液(稀释5倍)0.10.10.10.10.10.1混匀，37℃水浴7.5分钟，然后向每管滴加2滴碘液。H205.95.85 .75.65.56混匀，观察现象，选出颜色最浅的那管做下一步实验。结果：0.4ml淀粉为最适量（颜色最浅）4.酶液稀释倍数的确定如下表配制酶的稀释液。稀释倍数51015202530酶液(mL)10.50.40.250.20.2H20(mL)44.55.64.754.85.8表3a酶液稀释倍数用量(mL）另取试管各取配好的稀释液0.1ml：稀释倍数51015202530空白7.0 pH缓冲液0.90.90.90.90.90.90.92.5 g/L淀粉由第3步操作确定为0.4ml淀粉唾液0.10.10.10.10.10.10.1混匀，37℃水浴7.5分钟，然后向每管滴加2滴碘液H206666666混匀，观察现象，并选择适中一支，记录稀释倍数结果：观察到酶稀释十倍后颜色最浅，所以最适合。5.最适PH的测定另取7支试管,进行编号,按下表加入试剂，进行测定。用量（mL）管号1234567pH6.06.26.46.66.87.07.2pH缓冲液0.90.90.90.90.90.90.92.5 g/L淀粉由第3步操作确定为0.4ml测得倍数唾液0.10.10.10.10.10.10.1混匀，３７℃水浴7.5min，然后每管加2滴碘液H206666666A660nm0.3310.2570.1920.3090.2890.3740.402二、实验结果由以上实验过程可以得出，唾液淀粉酶的最适pH为6．4。三、讨论唾液的pH一般为6.4-6.8，唾液淀粉酶的最适pH约为6.4。在这次实验中可能导致误差的因素为：(1)制备酶时存在一些不足。直接漱口获得酶的方法对酶浓度的影响较大；每个人因为个体差异，其唾液淀粉酶对酸碱度的适应程度不同。(2)实验设置不理想。固定的缓冲液配置不够精确；水浴保温时间和反应时间不一致。另外，实验中碘液的浓度也直接关系到对实验结果的准确观察，若实验中配制的碘液浓度高，其颜色将实际反应的颜色遮蔽，对淀粉用量和淀粉稀释倍数的判定容易造成影响，使实验结果