rp hplc法测定血浆中聚乙二醇尿酸酶浓度的方法 - 重庆理工大学学报.pdfVIP

第２４卷 第５期 重 庆 理 工 大 学 学报（自然科学） ２０１０年５月 　 Ｖｏｌ．２４ Ｎｏ．５ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｏｎｇｑｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ） Ｍａｙ．２０１０  ＲＰＨＰＬＣ法测定血浆中聚乙二醇尿酸酶浓度的方法 范　开，马雪丰，谢　敏，胡春兰，谭克海 （重庆理工大学 药学与生物工程学院，重庆　４０００５０） 摘　　　要：建立一种快速、稳定、灵敏度高的测定血浆中聚乙二醇尿酸酶浓度的高效液相色谱 方法。将血浆样品与尿酸反应５ｍｉｎ，加入高氯酸终止，经高速离心，取上清液２０ Ｌ检测。色谱 μ 柱采用ＷａｔｅｒｓｓｙｍｍｅｔｒｙＣ１８（４．６×２５０ｍｍ，５ ｍ），流动相为磷酸－甲醇－超纯水（３∶１０∶４８７）， μ 流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长２９３ｎｍ。通过体系中尿酸的降低值间接测定血浆中聚乙二醇尿酸酶 的浓度。结果表明，聚乙二醇尿酸酶在３１．２５ｎｇ／ｍＬ～２０ ｇ／ｍＬ范围内呈线性关系，ｒ＝０．９９９４， μ 日内、日间精密度均小于１０％，回收率在８８％～１０５％。 关 键 词：聚乙二醇尿酸酶 ；ＲＰＨＰＬＣｇ；浓度 中图分类号：Ｒ９４３　　　　文献标识码：Ａ 文章编号：１６７４－８４２５（２０１０）０５－００２９－０４ ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＰＥＧＵｒｉｃａｓｅＣｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｉｎＰｌａｓｍａｂｙＲＰＨＰＬＣ ＦＡＮＫａｉ，ＭＡＸｕｅｆｅｎｇ，ＸＩＥＭｉｎ，ＨＵＣｈｕｎｌａｎ，ＴＡＮＫｅｈａｉ （ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌａｎｄＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００５０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｒａｐｉｄ，ｓｔａｂｌｅａｎｄｈｉｇｈｌｙｓｅｎｓｉｔｉｖｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＰＥＧｕｒｉｃａｓｅｃｏｎｃｅｎｔｒａ ｔｉｏｎｉｎｐｌａｓｍａｂｙＲＰＨＰＬＣｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｔｈｅｐｌａｓｍａｓａｍｐｌｅｓｒｅａｃｔｅｄｗｉｔｈｕｒｉｃａｃｉｄｆｏｒ５ｍｉｎ， ｔｈｅｎｔｈｅｒｅａｃｔｉｏｎｗａｓｔｅｒｍｉｎａｔｅｄｂｙａｄｄｉｎｇｐｅｒｃｈｌｏｒｉｃａｃｉｄａｎｄｈｉｇｈｓｐｅｅｄｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｅ。Ｔｈｅｓｕｐｅｒｎａ ｔａｎｔ２０ Ｌｉｎｊｅｃｔｉｏｎｗａｓａｎａｌｙｚｅｄ．ＴｈｅａｎａｌｙｓｉｓｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＲＰＨＰＬＣｕｓｉｎｇＣ１８ｃｏｌｕｍｎ μ （４．６×２５０ｍｍ，５ ｍ）ｗｉｔｈａｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｏｆｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃａｃｉｄｍｅｔｈａｎｏｌｗａｔｅｒ（３：１０： μ ４８７，ｖ／ｖ）．Ｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ１．０ｍＬ／ｍｉｎａｎｄｔｈｅｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄａｔ２９３ｎｍ．Ｔｈｅｃｏｎｃｅｎ ｔｒａｔｉｏｎｏｆＰＥＧｕｒｉｃａｓｅｉｎｐｌａｓｍａｗａｓｃａｌｃｕｌａｔｅｄｉｎｄｉｒｅｃｔｌｙｂｙｌｏｗｅｒｉｎｇｔｈｅｖａｌｕｅｏｆｖｅｒｓｕｓｕｒｉｃａｃｉｄｄｉ ｇｅｓｔ．ＴｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｏｆＰＥＧｕｒｉｃａｓｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｄｉｓｐｌａｙｅｄｈｉｇｈｌｙｒｅｌａｔｉｖｅｌｉｎｅａｒｉｔｙｏｖｅｒｔｈｅ ｒａｎｇｅｏｆ３１．２５ｎｇ／ｍＬ２０ｕｇ／ｍＬ．ＴｈｅｉｎｔｒａｄａｙａｎｄｉｎｔｅｒｄａｙＲＳＤｗｅｒｅｎｏｔｍｏｒｅｔｈａｎ１０％．