利用hplc 及q-tof 质谱仪分析聚乙二醇及单、二聚乙二醇化 - agilent.pdfVIP

利用 HPLC 及 Q-TOF 质谱仪分析聚乙二 醇及单、二聚乙二醇化的治疗性蛋白 应用简报 作者 摘要 Ravindra Gudihal 及 Suresh Babu CV 聚乙二醇化的多肽和蛋白质为生物治疗药物的详细结构表征带来重大挑战，这主要是由于 安捷伦科技公司 （印度） 聚乙二醇 (PEG) 具有异质性。本应用简报描述了一种联用 Agilent HPLC 及 Agilent 6520 印度班加罗尔 精确质量数 Q-T OF LC/ MS 系统分析聚乙二醇及聚乙二醇化蛋白的方法。其使用了一种 电荷剥离剂 （三乙胺）作为柱后添加剂，这样有助于简化质谱图，因此可更好地阐释结 Ning Tang 安捷伦科技公司 果。结果表明聚乙二醇和聚乙二醇化蛋白质的质谱图质量均得到显著改善。 美国加利福尼亚州圣克拉拉市 Sundaram Palaniswamy, Umamaheshwari S 及 Suneel Basingi GanGagen 生物技术公司 印度班加罗尔 前言 于聚乙二醇分子本身的异质性，聚乙二醇 由一个注射泵通过三通接头导入，如图1 2,3 化修饰可导致产品的异质性。因此，在产 所示。 作为一个电荷降低试剂，T EA 液相色谱 质谱 技术在蛋白质表 / (LC/MS) 品发布前分析聚乙二醇试剂及聚乙二醇化 在进入质谱仪前与聚乙二醇化蛋白样品混 征方面功能强大、灵敏度高。在蛋白质药 蛋白药物非常重要。本研究中，我们通过 合。胺类化合物的添加可改善质谱图，有 物的监管审批中，采用 LC/MS 方法来进 联用 Agilent 1260 Infinity LC 及 Agilent 助于结果解释。结果表明所研究的聚乙二 行定性和定量分析。聚乙二醇化是生物制 6520 Q-TOF 质谱仪对完整的聚乙二醇化治 醇化治疗性蛋白与聚乙二醇试剂一样，都 药业中一种重要的共价修饰方法，可提高 疗性蛋白样品和聚乙二醇试剂进行分析。 具有异质性。聚乙二醇化后，完整蛋白分 1 蛋白的治疗功效。 聚乙二醇化过程指的 聚乙二醇和聚乙二醇化蛋白从 HPLC 分离 析显示出多重峰，每个峰之间的质量偏移 是聚乙二醇与治疗性蛋白的化学结合。这 及洗脱出来，而电荷剥离剂三乙胺 (TEA) 约为44 Da ，为乙二醇的质量。 种修饰可以增加蛋白药物的半衰期。但由 图 仪器配置包含 系统及 精确质量数 质谱仪。采用注射泵通过 1. Agilent 1260 Infinity LC Agilent 6520 Q-TOF 三通导入三乙胺溶液