CD40免疫组化试剂盒.docVIP

上海一研生物科技有限公司的联系方式：电话：021021手邮箱：yyswbio@163.com QQ 联系人高丽琴?????黄智??地址： CD40 免疫组化试剂盒 该试剂盒以 HRP 标记的链霉亲和素复合物（HRP Streptavidin Conjugate， HRP-SA）为基础，可用于检测血液,细胞、组织内的特异性 CD40 抗原。该试剂盒 具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的 CD40 一抗与相 应靶抗原结合后，用生物化二抗与一抗特异性结合，最后加入 HRP-SA，形成抗 原—特异一抗—生物素化二抗—HRP-SA 复合物，显微镜下观察成像。 试剂盒所含试剂： 试剂 A 通透液：0.1% Triton-X 100 10 mL（选用） 试剂 B 封闭缓冲液（封闭用） 20 mL 试剂 C （原装进口分装）已稀释的即用型 CD40 一抗（2.5ml） 试剂 D （原装进口分装）生物素化羊抗兔 IgG 1 支 （浓度 1.5 mg/mL，稀释比为 1:300~1:500）50 μL+抗体稀释液 20ml 试剂 E HRP-SA 复合物 1 支（浓度 1 μM，稀释比 1:50~1:200）100 μL 试剂 F DAB 显色液 5ml 用户自备试剂： 1． 10mM TBS（pH7.2~7.4） 三羟基氨基甲烷 1.21g 氯化钠 7.6g 加蒸馏水 800mL，浓盐酸调 pH 值至 7.2~7.4，最后定容至 1000mL TBS-T：TBS+Tween 20（0.05%体积比） 2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液） 10mM pH6.0 柠檬酸缓冲液 柠檬酸 0.38g 柠檬酸三钠 2.45g 加蒸馏水 900mL，浓盐酸调 pH 值至 6.0，最后定容至 1000mL 或：0.5M EDTA 修复液（pH8.0） EDTA·2H2O 186.1g 加蒸馏水 700mL，用 10mM NaOH 调 pH 值至 8.0，最后定容至 1000Ml 3. 缓冲甘油封固剂 10 mL 4. Tween 20 5 mL 石蜡包埋组织切片免疫染色 实验步骤（建议方案 ）： 石蜡包埋组织切片 3~4μm 厚度 1.烤片： 将待做切片置于切片架上，于 60恒温烤箱中至少烤 1 hr； 2.脱蜡： 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡 3 次（即二甲苯、、），每次 10 min； 3.水化： 切片经下行酒精水化，无水乙醇 5min，95%乙醇 2 次（每次 2min），85% 乙醇 2 min；75%乙醇 2min，自来水冲洗，ddH2O 洗 2×2min； 4.抗原修复： 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温 度达到 98~100）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O 洗 2× 2min，TBS 洗涤（2×2min）（具体修复方法见附 1）* 注：有些抗原勿需修复， 直接进入第 5 步封闭。 5.封闭： 滴加试剂 B，37湿盒孵育 30 min； 6.加一抗：滴加用试剂 C（即用型一抗），37湿盒孵育 2 hr 或 4过夜； 7.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）； 8.封闭： 滴加试剂 B，37湿盒孵育 10 min； 9.加二抗： 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试剂 D），37湿盒中孵育 30 min； 10.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）； 11.封闭： 滴加试剂 Tween 20，37湿盒孵育封闭 20 min； 12.加 HRP-SA： 滴加用试剂 C 稀释的试剂 E（1：50~200，终浓度 5~20 nM），37 湿盒中孵育 30 min； 13.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min），TBS 洗涤（2×5 min）； 14.显色：应用 DAB 溶液（试剂 F）显色； 15.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明； 16.封片： 待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片； 17.观察成像： 显微镜下观察成像。 注意事项： 1. 修复后缓冲液须自然冷却，自来水冲洗后方能把切片取出，骤冷有可能导致 结晶或抗原封闭。 2. 缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能反复使 用。 3. 若试剂为微量浓缩液，用前应低速离心，将内盖和管壁附着的溶液离到底部。 4. 封片前一定要换用 TBS 充分洗涤，以便洗去组织上残留的 Tween 20，否则会 影响结果观察。 5. 如须复染细胞核，则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的