电离辐射对人鼻咽癌细胞株CNE2Z体外表达血管内皮生长因子的影响论文.docVIP

　　电离辐射对人鼻咽癌细胞株CNE2Z体外表达血管内皮生长因子的影响论文 【摘要】 目的 探讨电离辐射对人鼻咽癌细胞体外表达血管内皮生长因子（VEGF）的影响。方法 人鼻咽癌细胞株E2Z置RPMI 1640培养液培养，实验分为两组，剂量梯度组分别给予2、4、6、8、12、16 Gy电离辐射；时间梯度组给予6 Gy照射；收集细胞上清液，双抗体夹心ELISA法测定VEGF表达水平。结果 与阴性处理细胞比较，人鼻咽癌细胞株E2Z体外接受不同剂量辐照后，VEGF表达明显增高，且具有剂量依赖性和时程依赖性。结论 电离辐射能诱导人鼻咽癌细胞VEGF高表达，这可能是临床肿瘤抗辐射的机制之一。 【关键词】 电离辐射；鼻咽癌细胞；血管内皮生长因子 【Abstract】 Objective To investigate the effects of ionizing radiation (IR) on vascular endothelial groa cells.Methods E2Z nasopharygeal carcinoma cells aintained in RPMI 1640 medium and exposed to IR in incremental doses of 2,4,6,8,12,16 Gy. These cells e after exposure, and the media easurement of VEGF protein levels by ELISA. Results Exposure of E2Z cells to IR induced significant upregulation of VEGF expression. VEGF levels exhibited an IR  and timedependent increase in parison ediated induction of VEGF in nasopharyngeal carcinoma cells may contribute to clinically tumour radioresistance. 【Key a, VEGF 鼻咽癌是我国常见的恶性肿瘤之一.freell单细胞悬液，2 ml/孔接种于六孔板中，待细胞贴壁后（约12 h），采用Siemens直线加速器6 MeV X射线，吸收剂量率2 Gy/min，源皮距100 cm，射野大小10 cm×20 cm，从下向上照射。实验分为两组：剂量梯度组分别给予0、2、4、6、8、12、16 Gy照射；时间梯度组给予6Gy照射。 1.2 条件培养液的收集 剂量梯度组于照射后24 h，时间梯度组于照射后0、12、24、36、48 h时间点终止培养，收集细胞培养液，转移至1.5 ml Eppendorf管，4℃，2 000 r/min离心5 min，吸取上清液-20℃冷冻保存备用。 1.3 条件培养液VEGF浓度的测定 采用双抗体夹心ELISA法测定细胞上清液VEGF。人VEGF ELISA试剂盒购自中杉生物工程公司，具体操作按说明书进行。 1.4 数据分析与统计 实验数据资料统计采用统计学软件SPSS 10.0进行单因素方差分析。 2 结果 不同剂量射线照射24 h后，E2Z细胞VEGF的表达均增高。4 Gy时最高，后随剂量的增加有所下降，与对照组0 Gy比较，差异均有显著性（P 005），见表1。 表1 不同剂量照射24 h后E2Z细胞培养液中VEGF浓度 略 6 Gy照射后，各时间点条件培养液中VEGF的含量逐渐升高，36 h时与0 h比较，差异有显著性（P 0.01），到48 h时达最高水平,与对照组0 h时比较，差异有极显著性（P 001），见表2。 表2 照射后不同时间E2Z细胞培养液中VEGF浓度6 Gy照射后时间（略） 3 讨论 放射治疗失败的主要原因有肿瘤细胞的放射抵抗性、肿瘤细胞的远处转移等。低氧是导致肿瘤放射抵抗的一个重要原因［2］，低氧能诱导肿瘤细胞表达VEGF，放射也可以诱导VEGF的高表达［3，4］。肿瘤细胞产生的VEGF不仅以旁分泌方式刺激血管生成，而且以自分泌方式刺激肿瘤细胞自身的生长。VEGF可能在肿瘤细胞以及肿瘤血管内皮细胞经过放射损伤后的修复过程中发挥一定的作用［5］。放射治疗不仅对肿瘤细胞有直接或间接杀伤作用，还具有封闭肿瘤血管的作用，可使血管内皮细胞退化、变性。随着肿瘤缩小，肿瘤微血管更加迂曲、变形、管腔缩小，血流缓慢，血栓形成，使肿瘤微血管进入封闭状态［6］。然而，已有文献报道，放射治疗本身也可引起肿瘤血管生成活跃，VEGF分泌增加［7~9］。其