特发性血小板减少性紫癜与EB病毒感染的关系论文.docVIP

　　特发性血小板减少性紫癜与EB病毒感染的关系论文 【摘要】 目的 探讨特发性血小板减少性紫癜(ITP)与EB病毒（EBV）感染的相互关系。方法 采用血清酶联免疫吸附试验(ELISA)及实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）技术，对68例ITP和14例健康儿童血清EBV衣壳抗原IgM （EBV-CA-IgM）及外周血单核细胞内EBV-DNA进行定量检测，并结合临床进行分析。结果 68例ITP病儿EBV感染30例(44%)，其中EBV-DNA(-)/EBV-IgM(+)24例，EBV-DNA(+)/EBV-IgM(+)6例，EBV-DNA含量每升（4.55±7.19）×108拷贝；6例EBV-DNA（+）病儿血清EBV-CA-IgM阳性5例，另1例EBV-CA-IgM由阴性转为阳性。正常对照组血清EBV-CA-IgM及EBV-DNA均阴性。EBV感染组、EBV-DNA(-)/EBV-IgM(+)组及EBV-DNA(+)/EBV-IgM(+)组与非EBV感染组ITP病儿外周血的白细胞数比较差异有统计学意义(F=5.03,q=3.70~4.49,P 0.01)； EBV-DNA(-)/EBV-IgM(+)组与EBV-DNA(+)/EBV-IgM(+)组ITP病儿外周血的白细胞数差异无统计学意义(q=1.45,P 0.05)。非EBV感染ITP存在T淋巴细胞亚群的异常,即CD4+细胞降低,CD8+细胞升高。EBV感染ITP病儿尤其EBV-DNA(+)/EBV-IgM(+)组病儿T淋巴细胞总数亦降低，CD4+细胞降低明显。结论 EBV感染ITP存在T淋巴细胞免疫功能下降及紊乱.freelbocytopenia purpura (ITP). MethodsSerum EBV-CA-IgM and EBV-DNA in peripheral blood mononuclear cells in 68 cases e linked immunosorbent assay(ELISA) and fluorescence quantitative-polymerase chain reaction (FQ-PCR) and analyzed. ResultsIn 68 ITP, 30 negative into positive one e of platelet in ITP patients al group, al subjects and ITP munity,.freelultaneous antivirus and immunotherapy are necessary. Though the recovery of platelet takes time, its prognosis is good. ［KEY 抗体（EBV-CA-IgM）及外周血单核细胞内EBV-DNA的含量，现将结果报告如下。 1 资料和方法 1.1 一般资料 ITP病儿68例，为青岛大学医学院附属医院小儿血液科2004年1月~2006年12月住院病儿,男32例，女36例；年龄6个月~15岁，中位年龄6岁。ITP诊断参照国际儿童ITP研究组2006年提出的ITP标准：有血小板减少( 150×109/L)和(或)出血表现, 其他方面完全正常并排除其他可以引起血小板减少的疾病［4］。另取14例健康儿童作为正常对照组，其中男8例，女6例；年龄2~10岁，中位年龄6岁。 1.2 检测指标及方法 1.2.1 EBV-CA-IgM 取受检者静脉血2 mL,常规离心15 min后,吸取血清，采用ELISA方法检测。试剂盒由深圳博卡生物有限公司提供。严格按试剂盒说明操作。结果阳性者再用酶标仪(德国,ＳIＧＭＡ 960型)测定吸光度值验证。以EBV-CA-IgM阳性和(或)EBV-CA-IgG阳性(EBV-CA-IgG≥1∶640)或恢复期升高4倍以上,EBV-DNA定量阳性者确定为EBV感染［5］；不满足以上条件者为非EBV感染。将EBV感染者又分为EBV-DNA(-)/EBV-IgM(+)及EBV-DNA(+)/EBV-IgM(+)。 1.2.2 EBV-DNA定量 采用FQ-PCR技术。取EDTA抗凝外周血2 mL，用淋巴细胞分离液分离沉淀白细胞，然后加50 μL DNA提取液充分混匀，沸水浴10 min转至4 ℃静置8~12 h以确保病毒颗粒充分裂解。10 000 r/min离心5 min,取上清液2 μL做PCR扩增。按照10 倍梯度稀释EBV-DNA阳性定量标准品,-20 ℃保存。阴性质控品、阳性标准品均来自EBV PCR 荧光检测试剂盒（购自中山大学达安基因股份有限公司）。将处理后样品、阳性标准品(5种浓度)、阴性对照品2 μL加入专