特发性血小板减少性紫癜患儿外周血T细胞亚型的分析论文.docVIP

　　特发性血小板减少性紫癜患儿外周血T细胞亚型的分析论文 .freelbocytopenic purpura，ITP）患儿外周血Th/Tc、Th1/Th2、Tc1/Tc2细胞的平衡状态，探讨T细胞亚群失衡在ITP发病机制中的作用。收集30例ITP患儿外周抗凝静脉血，分离纯化得T细胞，以PE标记的抗CRTH2单克隆抗体和Cy5标记的抗CD4、CD8单克隆抗体作双色流式细胞术检测.freelbocytopenic Purpura Abstract The pathogenesis of some autoimmune diseases has been considered to be related to abnormal differentiation of T cell subsets. This study ed at investigating the change of Th1-like and Th2-like cells balance in ITP children，and analyzing the role of T cell subsets disequilibrium in the pathogenesis of ITP. Peripheral blood T cells 30 ITP patients，the T-cells munofluorescence staining and bicolor floetry (FCM) in vitro. The results shomunity in ITP children shiftes to Th1 type immunity superiority，al differentiation of T cell subsets may play an important role in the pathologic process of ITP. Key bocytopenic Purpura； T cell subset; Th/Tc; Th1/Th2 ；Tc1/Tc2；CRTH2 特发性血小板减少性紫癜（idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP）是一种发病机制尚未完全明了的自身免疫性疾病。目前发现，ITP的发生、发展与患者体内Th1类/Th2类细胞的平衡失调有关［1、2］。目前认为，CRTH2 (chemoattractant receptor-homologs molecule expressed on Th2 cells)是Th2、Tc2特异性表面标志物［3］，本研究应用PE标记的抗CRTH2单克隆抗体和Cy5标记的CD4、CD8作双色流式细胞术检测ITP患儿及健康儿童外周血的T细胞各亚群的百分率。分别以CD4＋CRTH2-T、CD4＋CRTH2＋T、CD8＋CRTH2-T及CD8＋CRTH2＋T细胞代表Th1、Th2、Tc1及Tc2细胞，分别以CD4＋T、CD8＋T细胞代表Th、Tc细胞，并进一步探讨Th1类/Th2类细胞在ITP发病机制中的作用。 材料和方法 研究对象 30例ITP患儿均为广东医学院附属医院的患者，男14例，女16例，年龄3个月-12岁，中位年龄3.4岁，诊断均符合ITP诊断标准［4］，并于用药前取外周抗凝血。正常对照30例，为健康儿童，排除ITP及其它自身免疫病，其中男13例，女17例，年龄1-10岁，中位年龄5.3岁。 主要试剂和仪器 Cy5标记抗CD4、CD8单克隆抗体为EB公司产品，PE标记的抗CRTH2单克隆抗体为Miltenyibiotec公司产品，流式细胞仪为Beckman公司产品（型号为EPICS-XL），T细胞分离富聚柱（h CD3+ T Cell Enrichment Column）为Becton Dickinson公司产品，淋巴细胞分离液(密度为1.077)为Axis-Shield公司产品。 外周血T细胞的分离 无菌采集患儿及正常健康儿童外周静脉血5 ml，肝素抗凝，用淋巴细胞分离液分离得单个核细胞。放于无菌玻璃培养皿内在37℃下培养30分钟，去除黏附于玻璃培养皿的单核细胞，以获取悬浮的淋巴细胞。加入0.85% NH4Cl溶液溶解红细胞，经T细胞分离富聚柱采用负筛选法获得获纯化的T细胞。用20%的小牛血清RPMI 1640培养液调整细胞浓度约2×106/ml。S-AP/P免疫组织化学法检测其纯度大于98%，台盼蓝拒染法检测其活性大于95%。 T细胞亚群的测定 取3支试管，各加入100 μl T细胞悬液，3管分别加入小鼠抗人单克隆IgG1-PE和小鼠抗人单克隆IgG1-Cy5（阴性对照管）、抗CD4-Cy5和抗CRTH2-PE（CD4+管）、