灰树花多糖增强肿瘤细胞对放射治疗的敏感性及其分子机理初探论文.docVIP

　　灰树花多糖增强肿瘤细胞对放射治疗的敏感性及其分子机理初探论文 .freelRNA表达水平的变化并探讨两者协同作用的分子机理。方法 用CCK-8方法测定灰树花多糖与X-射线联合处理后HCT116的细胞存活率（cell survival rate，CSR）；用Apoptosis Ladder Detection Kit进行灰树花多糖与X-射线联合处理后细胞凋亡检测；用RT-PCR方法测定Bax 基因的表达。结果 (1）灰树花多糖与X-射线联合处理对肿瘤细胞的直接杀伤作用高于X-射线单独处理；(2）X射线与灰树花多糖联合处理时细胞发生凋亡；(3）X-射线与灰树花多糖联合处理后细胞发生凋亡的分子机理与细胞凋亡相关基因Bax的表达提高相关。结论 灰树花多糖对肿瘤放射治疗具有明显的增敏作用，联合使用可诱导肿瘤细胞凋亡.freel Grifola frondosa Promotes X-ray induced cell apoptosis through upregulation of Bax in HCT116 cells 【Abstract】 Objective To explore the efficiency of the polysaccharide extracted from Grifola frondosa，in enhancing sensitivity to X-ray irradiation in human colon cancer cells HCT116. The levels of Bax mRNA ent of the polysaccharide extracted from Grifola frondosa binated ent to demonstrate the molecular basis for the synergistic effects.Methods HCT116 cell survival rate onitored by CCK-8 kit. Apoptosis iquantitative PCR analysis of cellular RNA. Results Here Grifola frondosa and X-ray，paring to X-ray alone. Moreover，the effect of the polysaccharide extracted from Grifola frondosa bined ation. oreover，the effect of the polysaccharide from Grifola frondosa bined ay be involved in augmented the polysaccharide extracted from Grifola frondosa induced HCT116 cells sensitivity to X-ray irradiation. 【Key bh）DMEM（PAA Laboratories Gmbh，Hyclone）培养液在37℃，5%ＣＯ２条件下培养HCT116 细胞（human colon cancer cells）。 1.2 细胞毒性分析 取对数生长期HCT116细胞，常规消化成2×104/ml的单细胞悬液，接种于24孔细胞培养板。5%ＣＯ２、37℃环境中培养24h后对HCT116细胞分别用：(1）零处理；(2）灰树花多糖(3μg/ml）处理1天；(3）X-射线（4Gy）处理1天；(4）第1天X-射线（4Gy）处理，第2天灰树花多糖（3μg/ml）处理；(5）第1天、第2天都用X-射线（4Gy）处理细胞。X-射线的处理是采用西门子直线加速器12MeV电子线照射。次日每孔细胞中加入20μl的CCK-8试剂（Dojindo Laboratories），5%ＣＯ２、37℃环境中培养2h后，在酶标仪（BIO-TEK）上波长450nm处读取光密度A值，计算细胞存活率（cell survival rate，CSR）。 细胞存活率（CSR）=试验组A值〖〗对照组A值×100% 1.3 凋亡检测 取对数生长期HCT116细胞，常规消化成2×104/ml的单细胞悬液，接种于 3.5cm培养皿。5%ＣＯ２、37℃环境中培养24h后对HCT116细胞采用第1天X-射线（4Gy），第2天灰树花多糖（3μg/ml）的方法处理，对照组零处理。处理48h后，PBS洗涤细胞，用DNA结合染料Hoechst 33258 （0.5μg/ml ）染色，显微镜下观察和计数。随后上述48h处理细胞采用Apoptosis Ladder Detection Kit （olecul